| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 1 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 发光杆菌概论 | 第11页 |
| 1.2 发光杆菌的分类 | 第11-12页 |
| 1.3 发光杆菌的生活周期 | 第12-13页 |
| 1.4 发光杆菌的致病性与共生性 | 第13-17页 |
| 1.4.1 发光杆菌对靶标昆虫免疫系统的破坏 | 第14-15页 |
| 1.4.2 发光杆菌促进共生线虫的发育 | 第15-17页 |
| 1.4.3 发光杆菌与侵染期幼虫的定殖 | 第17页 |
| 1.5 发光杆菌的活性代谢产物 | 第17-21页 |
| 1.5.1 杀虫毒素 | 第17-21页 |
| 1.5.2 抑菌物质 | 第21页 |
| 1.6 发光杆菌的应用 | 第21-22页 |
| 1.7 立题依据 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、细胞及受试昆虫 | 第23-24页 |
| 2.1.2 培养基和抗生素 | 第24页 |
| 2.1.3 引物 | 第24-25页 |
| 2.1.4 分子生物学试剂 | 第25页 |
| 2.1.5 生化试剂及试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.6 琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.7 Bt感受态制备和转化试剂 | 第26页 |
| 2.1.8 SDS-PAGE试剂 | 第26页 |
| 2.1.9 Native-PAGE试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.10 胶内酶解溶液 | 第27页 |
| 2.1.11 PirAB重组蛋白纯化缓冲液 | 第27页 |
| 2.1.12 Bt重组菌包涵体溶解液 | 第27页 |
| 2.1.13 仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 基因组提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2 目的基因扩增 | 第29页 |
| 2.2.3 GB2005感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.4 pETDuet-pirA,pETDuet-pirB,pETDuet-pirAB载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5 pHT1AcPT-fusion,pGEX-fusion表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.6 重组质粒的电击转化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 双元毒素的表达及检测 | 第33-34页 |
| 2.2.8 PirAB的Native-PAGE检测 | 第34页 |
| 2.2.9 双元毒素质谱样品制备及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.10 蛋白浓度测定 | 第35页 |
| 2.2.11 PirAB及PirB的纯化和脱盐 | 第35页 |
| 2.2.12 Bt重组菌株和融合蛋白包涵体的形态观察 | 第35-36页 |
| 2.2.13 Bt重组菌株包涵体的提纯 | 第36页 |
| 2.2.14 Bt重组菌株包涵体的溶解性检测 | 第36页 |
| 2.2.15 枞色卷蛾中肠细胞CF-203的培养 | 第36-37页 |
| 2.2.16 双元毒素对受试细胞的细胞增殖率的影响 | 第37-38页 |
| 2.2.17 双元毒素PirAB-fusion与受试细胞孵育后的荧光免疫染色 | 第38页 |
| 2.2.18 受试细胞的DNA片段化检测 | 第38页 |
| 2.2.19 杀虫活性测定 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-52页 |
| 3.1 表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.2 PirAB的诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.3 PirAB双元毒素的纯化及脱盐 | 第43-44页 |
| 3.4 Bt重组菌株的表达时相 | 第44页 |
| 3.5 Bt重组菌株和融合蛋白包涵体形态观察 | 第44-45页 |
| 3.6 Bt重组菌株双元毒素包涵体的溶解性检测 | 第45-46页 |
| 3.7 双元毒素的质谱鉴定 | 第46-47页 |
| 3.8 双元毒素的细胞毒力 | 第47-50页 |
| 3.9 双元毒素的注射毒力 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 双元毒素影响受试细胞的亚细胞结构 | 第52-54页 |
| 4.2 双元毒素引起昆虫黑色素沉积 | 第54-55页 |
| 4.3 融合蛋白的柔性接头 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第65-66页 |
| 课题受资助的项目 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
