| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 1.1 周质磷酸结合蛋白(PBP) | 第12-17页 |
| 1.1.1 周质表达系统 | 第12-13页 |
| 1.1.2 周质结合蛋白 | 第13-14页 |
| 1.1.3 磷酸结合蛋白 | 第14-17页 |
| 1.2 嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase) | 第17-20页 |
| 1.2.1 性质与分类 | 第17-19页 |
| 1.2.2 PNPase主要用途 | 第19-20页 |
| 1.2.3 PNPase的表达与纯化 | 第20页 |
| 1.3 PBPm-MDCCATPase活力检测体系 | 第20-22页 |
| 1.3.1 ATPase活力检测 | 第20-21页 |
| 1.3.2 PBPm-MDCC荧光探针 | 第21-22页 |
| 1.4 解旋酶综述 | 第22-30页 |
| 1.4.1 解旋酶的概念和分类 | 第22-24页 |
| 1.4.2 解旋酶的结构特征 | 第24-26页 |
| 1.4.3 解旋酶的酶学特性和作用机理 | 第26-28页 |
| 1.4.4 解旋酶的常用研究方法 | 第28-30页 |
| 1.5 ScPif1解旋酶 | 第30-31页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第31-34页 |
| 第二章 PBP突变体基因的克隆、表达与纯化 | 第34-49页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第34-35页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第34页 |
| 2.1.3 实验溶液 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-42页 |
| 2.2.1 PBPm(A197C)单突变体基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.2 PBPm(A17C/A197C)双突变体基因的克隆 | 第36-38页 |
| 2.2.3 原核表达载体pET15b-SUMO-PBPm(A197C)单突变的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.4 原核表达载体pET15b-SUMO-PBPm(A17C/A197C)双突变的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.5 重组蛋白PBPm的诱导表达纯化条件的摸索 | 第40页 |
| 2.2.6 重组蛋白PBPm的诱导表达 | 第40页 |
| 2.2.7 重组蛋白PBPm的纯化 | 第40-42页 |
| 2.2.8 重组蛋白PBPm的浓缩与保存 | 第42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-47页 |
| 2.3.1 PBPm(A197C)单突变的克隆与载体构建 | 第42-43页 |
| 2.3.2 PBPm(A17C/A197C)双突变体的克隆与载体构建 | 第43-44页 |
| 2.3.3 重组蛋白PBPm诱导表达条件的摸索 | 第44-45页 |
| 2.3.4 重组蛋白PBPm的纯化 | 第45-47页 |
| 2.3.5 重组蛋白PBPm的浓缩与保存 | 第47页 |
| 2.4 实验小结 | 第47-49页 |
| 第三章 PNPase基因的克隆、表达与纯化 | 第49-55页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第49页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第49页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第49页 |
| 3.1.3 实验溶液 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 3.2.1 PNPase基因的克隆 | 第49-50页 |
| 3.2.2 原核表达载体pET15b-PNPase的构建 | 第50-51页 |
| 3.2.3 重组蛋白PNPase的诱导表达 | 第51页 |
| 3.2.4 重组蛋白PNPase的纯化 | 第51-52页 |
| 3.2.5 重组蛋白PNPase的浓缩与保存 | 第52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-54页 |
| 3.3.1 PNPase基因的克隆与载体构建 | 第52-53页 |
| 3.3.2 重组蛋白PNPase的表达与纯化 | 第53页 |
| 3.3.3 重组蛋白PNPase的浓缩与保存 | 第53-54页 |
| 3.4 实验小结 | 第54-55页 |
| 第四章 PBPm-MDCCATPase活力检测体系的建立 | 第55-62页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第55页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第55页 |
| 4.1.3 实验溶液 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 PBPm蛋白的标记 | 第55页 |
| 4.2.2 PBPm-MDCC的纯化 | 第55-56页 |
| 4.2.3 PBPm-MDCC的浓缩与保存 | 第56页 |
| 4.2.4 PBPm-MDCC检测体系的构建 | 第56页 |
| 4.2.5 PBPm-MDCC检测体系对Pi响应测试 | 第56-57页 |
| 4.3 实验结果 | 第57-61页 |
| 4.3.1 PBPm蛋白的标记 | 第57页 |
| 4.3.2 PBPm-MDCC的纯化 | 第57-58页 |
| 4.3.3 PBPm-MDCC的浓缩与保存 | 第58页 |
| 4.3.4 Pi-mop对PBPm-MDCC检测体系的影响 | 第58-60页 |
| 4.3.5 PBPm-MDCC检测体系Pi响应测试 | 第60-61页 |
| 4.4 实验小结 | 第61-62页 |
| 第五章 PBPm-MDCC检测体系在ScPif1解旋酶ATPase活力测定中的应用 | 第62-70页 |
| 5.1 实验材料和仪器 | 第62-63页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第62页 |
| 5.1.3 实验溶液 | 第62-63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 5.2.1 重组蛋白ScPif1的表达 | 第63页 |
| 5.2.2 重组蛋白ScPif1的纯化 | 第63-64页 |
| 5.2.3 ScPif1解旋酶的浓缩与保存 | 第64页 |
| 5.2.4 ScPif1解旋酶的DLS分析 | 第64页 |
| 5.2.5 ScPif1解旋酶的ATPase活力测定 | 第64-65页 |
| 5.2.6 ScPif1解旋酶的NTPase活力测定 | 第65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-69页 |
| 5.3.1 HiTrapSPHP柱纯化 | 第65-66页 |
| 5.3.2 Superdex200层析柱纯化 | 第66页 |
| 5.3.3 ScPif1解旋酶的DLS分析 | 第66-67页 |
| 5.3.4 ScPif1解旋酶的ATPase活力测定 | 第67-68页 |
| 5.3.5 ScPif1解旋酶的NTPase活力测定 | 第68-69页 |
| 5.4 实验小结 | 第69-70页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第70-73页 |
| 6.1 结论 | 第70-72页 |
| 6.2 创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 附录 | 第83-89页 |
| 缩略词 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-94页 |
| 作者简介 | 第94页 |
