| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 植物中miRNA的形成及作用机制 | 第11-12页 |
| 1.1.1 miRNA的简介 | 第11页 |
| 1.1.2 miRNA的产生及作用机制 | 第11-12页 |
| 1.2 植物中miR162的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 受miR162靶基因DCL1剪切的miRNAs的研究 | 第13页 |
| 1.4 低温、气孔与ABA的关系 | 第13-14页 |
| 1.4.1 低温与气孔 | 第13-14页 |
| 1.4.2 气孔与ABA | 第14页 |
| 1.4.3 低温与ABA | 第14页 |
| 1.5 ABA生物合成、代谢和信号转导途径 | 第14-17页 |
| 1.5.1 ABA生物合成途径及相关基因 | 第15页 |
| 1.5.2 ABA分解代谢途径及相关基因 | 第15-16页 |
| 1.5.3 ABA信号转导途径及相关基因 | 第16-17页 |
| 1.6 立题依据及目的意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-26页 |
| 2.1 超表达miR162和沉默miR162载体的构建 | 第18-20页 |
| 2.1.1 试验试剂与仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第18-20页 |
| 2.2 应用电击法表达载体转化农杆菌 | 第20-21页 |
| 2.2.1 试验器材 | 第20页 |
| 2.2.2 抗生素与培养基 | 第20页 |
| 2.2.3 试验方法 | 第20-21页 |
| 2.3 转基因番茄的遗传转化 | 第21-23页 |
| 2.3.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.3.2 所用激素配制与培养基配制 | 第21-22页 |
| 2.3.3 miR162转基因番茄的遗传转化 | 第22-23页 |
| 2.4 转基因番茄植株的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.4.1 利用探针PCR进行DNA水平检测 | 第23-24页 |
| 2.4.2 利用qRT-PCR进行RNA水平检测 | 第24-25页 |
| 2.5 低夜温下番茄叶片气孔超微结构的观察 | 第25页 |
| 2.6 低夜温下番茄 ABA 含量的测定 | 第25页 |
| 2.7 实时定量测定基因表达量 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-38页 |
| 3.1 双酶切法构建超表达载体pRI-miR162和沉默载体pRNAi-miR | 第26-27页 |
| 3.2 miR162超表达和沉默转基因植株的获得 | 第27-29页 |
| 3.2.1 农杆菌的电击转化及菌落PCR的鉴定 | 第27页 |
| 3.2.2 番茄pRI-miR162和pRNAi-miR162的遗传转化 | 第27-28页 |
| 3.2.3 番茄miR162超表达和沉默转基因植株的阳性鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 番茄miR162超表达和沉默转基因植株表型观察 | 第29-31页 |
| 3.4 低夜温下番茄叶片气孔开度的变化 | 第31页 |
| 3.5 低夜温下番茄叶片Fv/Fm的变化 | 第31-32页 |
| 3.6 低夜温下番茄叶片ABA含量的变化 | 第32页 |
| 3.7 低夜温下ABA合成、分解和信号途径相关基因的表达分析 | 第32-35页 |
| 3.7.1 低夜温下ABA合成途径相关基因表达量的变化 | 第32-33页 |
| 3.7.2 低夜温下ABA分解途径相关基因表达量的变化 | 第33-34页 |
| 3.7.3 低夜温下 ABA 信号转导途径中相关基因表达量的变化 | 第34-35页 |
| 3.8 低夜温下冷胁迫相关基因CBF1、CBF2和CBF3的变化 | 第35页 |
| 3.9 番茄叶片中DCL1剪切的miRNAs及其靶基因的变化 | 第35-36页 |
| 3.9.1 miR162超表达和沉默转基因植株中DCL1的表达分析 | 第35-36页 |
| 3.9.2 miR162超表达和沉默转基因植株中DCL1剪切的miRNAs表达分析 | 第36页 |
| 3.10 DCL1剪切的miRNAs靶基因顺式作用元件分析 | 第36-38页 |
| 4讨论与结论 | 第38-43页 |
| 4.1 miR162超表达和沉默载体构建及转基因植株的获得 | 第38页 |
| 4.2 miR162影响了番茄植株表型及叶片气孔开闭情况 | 第38-39页 |
| 4.3 低夜温下miR162对气孔开度、ABA含量和Fv/Fm的影响 | 第39页 |
| 4.4 低夜温下miR162参与ABA合成分解和信号转导途径的调控 | 第39-41页 |
| 4.5 miR162影响了冷胁迫相关基因CBF1、CBF2和CBF3的表达 | 第41页 |
| 4.6 miR162通过调控靶基因DCL1调控miR160、miR164和miR171a | 第41-42页 |
| 4.7 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 攻读学位论文期间发表文章 | 第52-53页 |
