| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 荧光技术 | 第10-14页 |
| 1.1.1 荧光蛋白简介 | 第11页 |
| 1.1.2 荧光蛋白的发现 | 第11-12页 |
| 1.1.3 荧光蛋白的结构和发光原理 | 第12-13页 |
| 1.1.4 荧光蛋白的优势和改造 | 第13-14页 |
| 1.1.5 荧光蛋白的新进展 | 第14页 |
| 1.2 荧光共振能量转移 | 第14-18页 |
| 1.2.1 FRET元件组合方式 | 第15-16页 |
| 1.2.2 FRET荧光对CFP/YFP | 第16页 |
| 1.2.3 FRET最新进展 | 第16-18页 |
| 1.3 分子识别元件及σ~R-RsrA调控系统 | 第18-21页 |
| 1.3.1 分子识别元件 | 第18页 |
| 1.3.2 σ~R-RsrA调控系统 | 第18-21页 |
| 1.4 实验设计与原理 | 第21-23页 |
| 1.5 实验目的与意义 | 第23-24页 |
| 第2章 rsrA-cfp、sigR-yfp、cfp和yfp表达质粒构建 | 第24-51页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2.2 菌种与质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2.4 主要溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.3 方法 | 第26-38页 |
| 2.3.1 cfp、yfp、rsrA和sigR基因获取 | 第26-29页 |
| 2.3.2 表达质粒pET-28a(+)获取 | 第29-30页 |
| 2.3.3 双酶切连接 | 第30-33页 |
| 2.3.4 连接液转化大肠杆菌DH5α | 第33-34页 |
| 2.3.5 筛选大肠杆菌DH5α阳性克隆 | 第34-35页 |
| 2.3.6 酶切连接 | 第35-36页 |
| 2.3.7 连接液转化大肠杆菌DH5α | 第36页 |
| 2.3.8 筛选DH5α阳性克隆 | 第36-37页 |
| 2.3.9 阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第37页 |
| 2.3.10 筛选大肠杆菌BL21阳性克隆 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-50页 |
| 2.4.1 cfp、yfp、rsrA和sigR基因获取 | 第38-42页 |
| 2.4.2 表达质粒pET-28a(+)获取 | 第42页 |
| 2.4.3 基因与质粒双酶切 | 第42-44页 |
| 2.4.4 菌液PCR筛选DH5α阳性克隆 | 第44-46页 |
| 2.4.5 融合用cfp、yfp基因片段和重组质粒双酶切 | 第46-47页 |
| 2.4.6 双酶切筛选DH5α阳性克隆 | 第47-48页 |
| 2.4.7 筛选BL21阳性克隆 | 第48-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第3章 RsrA-CFP、sigR-YFP、CFP和YFP蛋白表达与纯化 | 第51-61页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51-53页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第51页 |
| 3.2.2 菌种 | 第51页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第51-52页 |
| 3.2.4 主要溶液配制 | 第52-53页 |
| 3.3 方法 | 第53-55页 |
| 3.3.1 蛋白表达优化 | 第53-54页 |
| 3.3.2 蛋白分离纯化 | 第54页 |
| 3.3.3 蛋白分析 | 第54-55页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 3.4.1 CFP、YFP蛋白荧光测定 | 第56-57页 |
| 3.4.2 IPTG诱导剂浓度对RCP和SYP蛋白表达的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.3 OD600值对RCP和SYP蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第59-60页 |
| 3.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第4章 RsrA-CFP、sigR-YFP蛋白活性研究 | 第61-70页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料 | 第61页 |
| 4.2.1 仪器 | 第61页 |
| 4.2.2 试剂 | 第61页 |
| 4.3 方法 | 第61-63页 |
| 4.3.1 RCP蛋白和SYP蛋白活性初步验证 | 第61页 |
| 4.3.2 RCP蛋白和SYP蛋白结合动力学 | 第61-62页 |
| 4.3.3 SYP蛋白浓度对FRET影响 | 第62页 |
| 4.3.4 锌离子对FRET的影响 | 第62页 |
| 4.3.5 DTT对FRET的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.6 DTT和H_2O_2顺序对FRET的影响 | 第63页 |
| 4.3.7 H_2O_2对RCP蛋白的构象影响 | 第63页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第63-69页 |
| 4.4.1 RCP蛋白和SYP蛋白活性初步验证 | 第63-64页 |
| 4.4.2 RCP蛋白和SYP蛋白结合动力学 | 第64-65页 |
| 4.4.3 SYP蛋白浓度对FRET影响 | 第65-66页 |
| 4.4.4 锌离子对FRET的影响 | 第66页 |
| 4.4.5 DTT对FRET的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.6 DTT和H_2O_2顺序对FRET的影响 | 第67-68页 |
| 4.4.7 H_2O_2对RCP蛋白的构象影响 | 第68-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第5章 结论与展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
