| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 研究报告 | 第13页 |
| 第一章 检测鸡源Toll 样受体2、3、4、7 和 IL-2 信号传导通路相关基因mRNA 荧光 RT-PCR 方法的建立 | 第13-28页 |
| 1 材料与方法 | 第13-17页 |
| ·病毒株和实验动物 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·引物设计及合成 | 第14-15页 |
| ·引物特异性鉴定 | 第15-16页 |
| ·鸡内源基因阳性标准品的制备 | 第16页 |
| ·鸡 TLR 2、TLR 3、TLR 4、TLR 7 和 ZEB 1、IL-2,IL-2R 基因 RRT-PCR 方法条件优化 | 第16-17页 |
| ·循环条件优化 | 第16页 |
| ·退火温度优化 | 第16-17页 |
| ·引物浓度优化 | 第17页 |
| ·标准曲线的建立 | 第17页 |
| ·特异性评价 | 第17页 |
| ·灵敏性测定 | 第17页 |
| ·重复性评价 | 第17页 |
| 2 结果 | 第17-26页 |
| ·引物的特异性 | 第17-18页 |
| ·优化的RRT-PCR 条件 | 第18-19页 |
| ·TLR 2 的最佳反应体系和反应条件 | 第18页 |
| ·TLR 3 的最佳反应体系和反应条件 | 第18页 |
| ·TLR 4 的最佳反应体系和反应条件 | 第18-19页 |
| ·TLR 7 的最佳反应体系和反应条件 | 第19页 |
| ·ZEB 1 最佳反应体系和反应条件 | 第19页 |
| ·IL-2 的最佳反应体系和反应条件 | 第19页 |
| ·IL-2R 的最佳反应体系和反应条件 | 第19页 |
| ·熔解曲线 | 第19-23页 |
| ·TLR2 的熔解曲线分析 | 第19-20页 |
| ·TLR3 的熔解曲线分析 | 第20-21页 |
| ·TLR4 的熔解曲线分析 | 第21页 |
| ·TLR7 的熔解曲线分析 | 第21-22页 |
| ·ZEB 1 的熔解曲线分析 | 第22页 |
| ·IL-2 的熔解曲线分析 | 第22-23页 |
| ·IL-2R 的熔解曲线分析 | 第23页 |
| ·标准曲线的建立 | 第23-25页 |
| ·TLR2 标准曲线 | 第23-24页 |
| ·TLR4 标准曲线 | 第24-25页 |
| ·特异性 | 第25-26页 |
| ·重复性 | 第26页 |
| ·灵敏性 | 第26页 |
| 3 讨论与小结 | 第26-28页 |
| 第二章Toll 样受体2、3、4、7 对NDV 强弱毒感染应答 | 第28-43页 |
| 1 材料与方法 | 第29-30页 |
| ·鸡胚和毒株 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·病毒感染 CEF 样本的制备及cDNA 的合成 | 第29-30页 |
| ·感染CEF NDV 的检测 | 第30页 |
| ·TLR 2、TLR 3、TLR 4、TLR 7 基因 mRNA 的定量检测 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-38页 |
| ·F48E9 TCID50 的测定结果及Lasota 病毒定量结果 | 第30-31页 |
| ·NDV 感染CEF | 第31-32页 |
| ·RNA 质量检测结果 | 第32-33页 |
| ·RRT-PCR 检测 TLR2、TLR3、TLR4、TLR7 mRNA 结果 | 第33-38页 |
| ·RRT - PCR 检测 TLR 2 mRNA 结果 | 第33-34页 |
| ·RRT - PCR 检测 TLR 3 mRNA 结果 | 第34-35页 |
| ·RRT - PCR 检测 TLR 4 mRNA 结果 | 第35-36页 |
| ·RRT - PCR 检测 TLR 7 mRNA 结果 | 第36-38页 |
| 3 讨论与小结 | 第38-43页 |
| ·TLR2 基因对NDV 的转录应答分析 | 第38-39页 |
| ·TLR3 基因对NDV 的转录应答分析 | 第39-40页 |
| ·TLR4 基因对NDV 的转录应答分析 | 第40-41页 |
| ·TLR7 基因对NDV 的转录应答分析 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第三章 IL-2 信号传导通路对NDV 强弱毒感染应答 | 第43-53页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| ·鸡胚和毒株 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·病毒感染 CEF 样本的制备及cDNA 的合成 | 第44页 |
| ·感染CEF NDV 的检测 | 第44-45页 |
| ·ZEB1、IL - 2、IL - 2R 基因 mRNA 的检测 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| ·F48E9 TCID50 的测定结果及Lasota 病毒定量结果 | 第45页 |
| ·NDV 感染CEF | 第45页 |
| ·RNA 质量检测结果 | 第45-46页 |
| ·RRT - PCR 检测 ZEB1、 IL - 2、 IL - 2R mRNA 结果 | 第46-49页 |
| ·RRT – PCR 检测 ZEB1 mRNA 结果 | 第46-47页 |
| ·RRT - PCR 检测 IL - 2 mRNA 结果 | 第47-48页 |
| ·RRT - PCR 检测 IL - 2R mRNA 结果 | 第48-49页 |
| 3 讨论与小结 | 第49-53页 |
| ·ZEB1 基因对 NDV 的转录应答分析 | 第49-50页 |
| ·IL-2 基因对NDV 的转录应答分析 | 第50-51页 |
| ·IL-2R 基因对NDV 的转录应答分析 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 综述 Toll 样受体与病毒相互作用的研究进展 | 第53-58页 |
| 1 TLR 的信号传导途径 | 第54页 |
| 2 TLR 与病毒的相互作用 | 第54-56页 |
| ·TLR 与双链 RNA 病毒的相互作用 | 第54-55页 |
| ·TLR 与单链 RNA 病毒的相互作用 | 第55-56页 |
| ·TLR 与 DNA 病毒的相互作用 | 第56页 |
| ·TLR 与病毒蛋白的相互作用 | 第56页 |
| 3 TLR 研究存在的问题和展望 | 第56-58页 |
| 结论与创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |
