| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩写名词表 | 第10-11页 |
| 1. 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 脂质的种类、分布和功能 | 第11-12页 |
| 1.2 脂肪酸合成代谢途径 | 第12-14页 |
| 1.2.1 脂肪酸合成代谢 | 第12-13页 |
| 1.2.2 脂肪酸合成途径的关键酶的特性 | 第13-14页 |
| 1.2.3 脂肪酸β-氧化 | 第14页 |
| 1.3 三酰甘油(TAG)及甘油磷脂的合成代谢途径 | 第14-15页 |
| 1.4 WRI1转录活性调控脂质代谢 | 第15-16页 |
| 1.5 长链酰基辅酶A合成酶(LACS)介导的脂代谢 | 第16-17页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2. 材料与方法 | 第18-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 常用仪器 | 第19页 |
| 2.1.5 所用引物 | 第19-21页 |
| 2.2. 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 全长cDNA的克隆及植物超表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.3 重组蛋白的表达和提取 | 第23页 |
| 2.2.4 蛋白检测(Western Blot) | 第23页 |
| 2.2.5 构建RNAi抑制表达载体 | 第23-24页 |
| 2.2.6 农杆菌介导油菜遗传转化 | 第24-25页 |
| 2.2.6.1 油菜外植体下胚轴的无菌培育 | 第24页 |
| 2.2.6.2 摇菌和外植体侵染 | 第24-25页 |
| 2.2.6.3 愈伤组织诱导、分化和幼苗培养 | 第25页 |
| 2.2.7 转化苗鉴定 | 第25页 |
| 2.2.7.1 抗生素筛选 | 第25页 |
| 2.2.7.2 PCR鉴定转化植株 | 第25页 |
| 2.2.8 半定量RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.2.9 Real time PCR | 第26页 |
| 2.2.10 叶片脂质提取 | 第26页 |
| 2.2.11 种子中油脂的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.12 GC分析脂质 | 第27页 |
| 2.2.13 亚细胞定位分析 | 第27页 |
| 3. 结果与分析 | 第27-43页 |
| 3.1. 油菜BnWRI1的克隆及其在油脂合成代谢的作用 | 第27-37页 |
| 3.1.1 油菜BnWRI1的克隆、载体构建和遗传转化 | 第27-28页 |
| 3.1.2 T_0代转化苗PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 3.1.3 分析T_0代BnWRI1转化植株的表达水平 | 第29-30页 |
| 3.1.4 超表达BnWRI1对油脂合成代谢通路相关基因的转录调控 | 第30-32页 |
| 3.1.5 超表达BnWRI1增强了油菜叶片和种子脂质的合成代谢 | 第32-35页 |
| 3.1.6 BnWRI1基因在油菜不同组织中表达情况 | 第35-36页 |
| 3.1.7 BnWRI1亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 3.2. 油菜长链-脂酰基辅酶A合成酶(LACS)基因的克隆和功能初探 | 第37-43页 |
| 3.2.1 油菜BnLACSs的克隆和遗传转化 | 第37-38页 |
| 3.2.2 T0代转化苗DNA鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.3 BnLACSs T0代转化苗表达量分析 | 第39页 |
| 3.2.4. 超表达BnLACSs对叶片油脂代谢的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.5 BnLACSs的原核载体构建和蛋白表达 | 第40-41页 |
| 3.2.6 BnLACSs基因RNAi载体构建 | 第41-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录 | 第50-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
