| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 第一章 C/EBPβ调控脂肪细胞分化的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1 C/EBPs家族及结构分析 | 第13-15页 |
| 1.2 C/EBPβ与脂肪细胞分化 | 第15-16页 |
| 1.3 C/EBPβ的表达调控及翻译后修饰 | 第16-18页 |
| 1.3.1 C/EBPβ的表达调控 | 第16-17页 |
| 1.3.2 C/EBPβ的翻译后修饰 | 第17-18页 |
| 第二章 FoxO1调控脂肪细胞分化的研究进展 | 第18-23页 |
| 2.1 FoxO1的蛋白修饰与脂肪细胞分化 | 第18-20页 |
| 2.1.1 FoxO1的乙酰化/去乙酰化 | 第18页 |
| 2.1.2 FoxO1的磷酸化 | 第18-19页 |
| 2.1.3 FoxO1的乙酰化/磷酸化与脂肪细胞分化 | 第19-20页 |
| 2.3 FoxO1的蛋白相互作用与脂肪细胞分化 | 第20-23页 |
| 2.3.1 FoxO1与核受体结合调节生脂 | 第20-21页 |
| 2.3.2 FoxO与其它靶蛋白互作调节脂肪形成 | 第21-23页 |
| 第二部分 实验研究 | 第23-52页 |
| 前言 | 第23-24页 |
| 第三章 猪FoxO1和C/EBPβ的组织及时序表达 | 第24-31页 |
| 3.1 实验材料 | 第24页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第24页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-26页 |
| 3.2.1 猪组织样品的采集 | 第24页 |
| 3.2.2 猪前体脂肪细胞的分离与培养 | 第24页 |
| 3.2.3 猪前体脂肪细胞诱导分化 | 第24页 |
| 3.2.4 RNA的提取 | 第24-25页 |
| 3.2.5 总RNA的反转录 | 第25页 |
| 3.2.6 Real itme-qPCR 检测 FoxOl 和 C/EBPJJ 的 mRNA 表达水平 | 第25-26页 |
| 3.2.7 总蛋白提取 | 第26页 |
| 3.2.8 Weatern Blotting | 第26页 |
| 3.2.9 数据分析 | 第26页 |
| 3.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 3.3.1 FoxO1和C/EBPβ在3日龄和180日龄大白猪的mRNA表达谱 | 第26-27页 |
| 3.3.2 FoxO1和C/EBPβ在3日龄和180日龄大白猪的蛋白表达谱 | 第27-28页 |
| 3.3.3 FoxO1和C/EBPβ在猪前体脂肪细胞分化过程中的mRNA表达谱 | 第28页 |
| 3.3.4 FoxO1和C/EBPβ在猪前体脂肪细胞分化过程中的蛋白表达谱 | 第28-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 干扰猪C/EBPβ抑制脂肪细胞分化及FoxO1的表达 | 第31-40页 |
| 4.1 实验材料 | 第31页 |
| 4.1.1 实验动物及细胞系 | 第31页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第31页 |
| 4.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 4.2.1 猪pLentiH1-C/EBPβ shRNA的构建 | 第31-32页 |
| 4.2.2 磷酸钙法包装慢病毒 | 第32页 |
| 4.2.3 孔稀释法测定慢病毒滴度 | 第32页 |
| 4.2.4 慢病毒感染猪的原代脂肪细胞 | 第32页 |
| 4.2.5 油红O染色 | 第32-33页 |
| 4.2.6 Real time-qPCR | 第33页 |
| 4.2.7 Western blotting | 第33页 |
| 4.2.8 数据分析 | 第33页 |
| 4.3 结果与分析 | 第33-38页 |
| 4.3.1 pLentiH1-C/EBPβ shRNA慢病毒干扰载体的构建 | 第33-34页 |
| 4.3.2 pLentiH1-C/EBPβ shRNA慢病毒的包装及感染猪原代脂肪细胞 | 第34-35页 |
| 4.3.3 猪原代脂肪细胞C/EBPβ的干扰效率检测 | 第35-36页 |
| 4.3.4 干扰C/EBPβ抑制猪前体脂肪细胞分化及FoxO1的表达 | 第36-38页 |
| 4.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第五章 干扰猪FoxO1抑制脂肪细胞分化及C/EBPβ的表达 | 第40-44页 |
| 5.1 实验材料 | 第40页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第40页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第40页 |
| 5.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 5.2.1 慢病毒感染猪的原代脂肪细胞 | 第40页 |
| 5.2.2 油红O染色 | 第40页 |
| 5.2.3 Real time-qPCR | 第40-41页 |
| 5.2.4 Western blotting | 第41页 |
| 5.2.5 数据分析 | 第41页 |
| 5.3 结果与分析 | 第41-43页 |
| 5.3.1 形态学观察干扰FoxO1促进猪脂肪细胞脂滴的积累 | 第41-42页 |
| 5.3.2 干扰FoxO1促进猪脂肪细胞分化及抑制C/EBPβ的表达 | 第42-43页 |
| 5.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第六章 共干扰猪FoxO1和C/EBPβ促进脂肪细胞分化 | 第44-48页 |
| 6.1 实验材料 | 第44页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第44页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第44页 |
| 6.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 6.2.1 慢病毒共感染猪的原代脂肪细胞 | 第44页 |
| 6.2.2 油红O染色 | 第44页 |
| 6.2.3 Real time-qPCR | 第44-45页 |
| 6.2.4 Western blotting | 第45页 |
| 6.2.5 数据分析 | 第45页 |
| 6.3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 6.3.1 共干扰C/EBPβ和FoxO1促进猪前体脂肪细胞脂滴的形成 | 第45-46页 |
| 6.3.2 共干扰C/EBPβ和FoxO1促进脂肪细胞分化相关基因的表达 | 第46-47页 |
| 6.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第七章 C/EBPβ和FoxO1在脂肪组织中的相互作用 | 第48-52页 |
| 7.1 实验材料 | 第48页 |
| 7.1.1 细胞系及实验动物 | 第48页 |
| 7.1.2 质粒 | 第48页 |
| 7.1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 7.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 7.2.1 免疫共沉淀 | 第48页 |
| 7.2.2 双荧光素酶报告基因分析 | 第48-49页 |
| 7.3 结果与分析 | 第49-51页 |
| 7.3.1 C/EBPβ和FoxO1在脂肪组织中存在蛋白相互作用 | 第49-50页 |
| 7.3.2 FoxO1通过结合C/EBPβ抑制其转录活性 | 第50-51页 |
| 7.4 讨论 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52页 |
| 创新点 | 第52页 |
| 进一步研究内容 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
