| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 引言 | 第12-17页 |
| 1.1 灰葡萄孢与作物灰霉病 | 第12-13页 |
| 1.1.1 灰葡萄孢的生物学特征 | 第12页 |
| 1.1.2 灰霉病的危害 | 第12-13页 |
| 1.2 灰葡萄孢的致病机制研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 致病酶类是灰葡萄孢成功侵入寄主细胞的先决条件 | 第13页 |
| 1.2.2 致病毒素是灰葡萄孢在寄主中顺利扩展的重要物质 | 第13-14页 |
| 1.2.3 信号转导途径相关基因在灰葡萄孢致病过程发挥重要调控作用 | 第14-15页 |
| 1.2.4 NO 作为信号分子也参与了灰葡萄孢的致病过程 | 第15页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-27页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第17页 |
| 2.1.2 主要供试试剂、缓冲液及反应底物溶液 | 第17页 |
| 2.1.3 培养基 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-27页 |
| 2.2.1 灰葡萄孢基因组 DNA 的提取与纯化 | 第18页 |
| 2.2.2 灰葡萄孢 BcPDR1 基因敲除载体的构建 | 第18-20页 |
| 2.2.3 灰葡萄孢 BcPDR1 基因敲除突变体的获得 | 第20-21页 |
| 2.2.4 BcPDR1 基因敲除转化子的分子鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.5 BcPDR1 基因敲除突变体的表型分析 | 第22页 |
| 2.2.6 BcPDR1 基因敲除突变体的致病力测定 | 第22-23页 |
| 2.2.7 BcPDR1 基因敲除突变体的致病因子分析 | 第23-24页 |
| 2.2.8 BcPDR1 基因敲除突变体的附着胞形成与穿透能力分析 | 第24页 |
| 2.2.9 BcPDR1 基因敲除突变体中致病相关基因的表达分析 | 第24-26页 |
| 2.2.10 BcPDR1 基因敲除突变体对非生物胁迫的反应分析 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-44页 |
| 3.1 灰葡萄孢 BcPDR1 基因敲除载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.1 BcPDR1 基因同源片段的克隆 | 第27页 |
| 3.1.2 BcPDR1 基因敲除载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.2 灰葡萄孢 BcPDR1 基因敲除突变体的获得 | 第28-31页 |
| 3.2.1 转化子的筛选 | 第28-29页 |
| 3.2.2 转化子的 PCR 鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.3 转化子的 Southern blotting 鉴定 | 第30页 |
| 3.2.4 转化子的 RT-PCR 鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌生长、发育的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.1 突变体的菌落形态观察 | 第31页 |
| 3.3.2 突变体的菌丝形态观察 | 第31-32页 |
| 3.3.3 突变体的生长速率测定 | 第32页 |
| 3.4 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌致病力的影响 | 第32-34页 |
| 3.4.1 突变体对番茄的致病力测定 | 第32-33页 |
| 3.4.2 突变体对拟南芥的致病力测定 | 第33-34页 |
| 3.5 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌致病因子的影响 | 第34-36页 |
| 3.5.1 突变体的胞壁降解酶活性测定 | 第34页 |
| 3.5.2 突变体的毒素活性分析 | 第34-35页 |
| 3.5.3 突变体的产酸能力分析 | 第35页 |
| 3.5.4 突变体的 NO 的产生和转运能力分析 | 第35-36页 |
| 3.6 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌的附着胞形成与穿透能力的影响 | 第36-38页 |
| 3.6.1 突变体的穿透能力测定 | 第36-37页 |
| 3.6.2 突变体的附着胞形成与穿透能力分析 | 第37-38页 |
| 3.7 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌致病相关基因表达的影响 | 第38-40页 |
| 3.7.1 突变体中信号途径相关基因的表达分析 | 第38-39页 |
| 3.7.2 突变体中致病因子相关基因的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.8 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌响应非生物胁迫的影响 | 第40-44页 |
| 3.8.1 突变体对渗透胁迫的敏感性测定 | 第40-42页 |
| 3.8.2 突变体的细胞完整性分析 | 第42-43页 |
| 3.8.3 突变体对氧胁迫的敏感性测定 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 灰葡萄孢 BcPDR1 基因及其功能 | 第44页 |
| 4.2 灰葡萄孢 BcPDR1 基因调控病菌致病力的机制 | 第44-46页 |
| 4.2.1 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌致病因子的调控 | 第44-45页 |
| 4.2.2 灰葡萄孢 BcPDR1 基因与病菌信号途径的关系 | 第45页 |
| 4.2.3 灰葡萄孢 BcPDR1 基因对病菌 NO 产生和转运的影响 | 第45-46页 |
| 4.3 今后的工作设想 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
