| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-43页 |
| 第一章 兔出血症病毒研究进展 | 第13-27页 |
| 1 RHDV基因组结构与功能 | 第13-14页 |
| 2 RHDV衣壳蛋白VP60结构 | 第14-16页 |
| 3 RHDV遗传进化 | 第16-17页 |
| 4 临床症状和组织病理学 | 第17页 |
| 5 病毒生存周期 | 第17-18页 |
| 6 抵抗RHD机制的形成/致病机理 | 第18-20页 |
| 参考文献 | 第20-27页 |
| 第二章 LamR蛋白研究进展 | 第27-43页 |
| 1 LamR的属性 | 第27-28页 |
| 1.1 基因和基因组 | 第27页 |
| 1.2 37 kDa LamR | 第27-28页 |
| 1.3 LamR的高分子形式 | 第28页 |
| 1.4 膜蛋白上的LamR | 第28页 |
| 2 LamR功能 | 第28-32页 |
| 2.1 功能地位 | 第28-29页 |
| 2.2 层黏连蛋白结合功能 | 第29页 |
| 2.3 核糖体功能 | 第29页 |
| 2.4 核功能 | 第29-30页 |
| 2.5 细胞骨架功能 | 第30页 |
| 2.6 发育、分化、组织应答 | 第30-31页 |
| 2.7 胞外基质修饰 | 第31页 |
| 2.8 信号转导 | 第31-32页 |
| 3 疾病和治疗 | 第32-34页 |
| 3.1 癌症 | 第32页 |
| 3.2 细菌、病毒和寄生虫感染 | 第32-33页 |
| 3.3 朊病毒和神经变性疾病 | 第33页 |
| 3.4 治疗方法 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-43页 |
| 第二篇 实验部分 | 第43-97页 |
| 第一章 RHDV衣壳蛋白P2诱饵蛋白的表达与鉴定 | 第43-55页 |
| 1 试验材料与方法 | 第43-49页 |
| 1.1 载体、蛋白、菌株、细胞及实验动物 | 第43-44页 |
| 1.2 试剂 | 第44页 |
| 1.3 P2亚区基因的克隆 | 第44-45页 |
| 1.4 pET-32a-P2重组载体的构建 | 第45-47页 |
| 1.5 单克隆抗体1B8腹水的制备和纯化 | 第47页 |
| 1.6 P2重组蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第47-49页 |
| 2 结果 | 第49-51页 |
| 2.1 pET-32a-P2重组表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.2 1B8抗体腹水纯化 | 第50-51页 |
| 2.3 P2重组蛋白表达、纯化及鉴定 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第二章 RHDV衣壳蛋白P2亚区与兔主要靶细胞相互作用蛋白的筛选和初步鉴定 | 第55-81页 |
| 1 试验材料与方法 | 第56-60页 |
| 1.1 蛋白及实验动物 | 第56页 |
| 1.2 试剂 | 第56页 |
| 1.3 兔肝、脾、肾细胞的分离 | 第56-57页 |
| 1.4 间接免疫荧光鉴定P2蛋白与兔主要靶细胞的结合 | 第57-58页 |
| 1.5 Co-IP筛选与RHDV P2蛋白相互作用的兔靶细胞蛋白 | 第58-59页 |
| 1.6 质谱鉴定及生物信息学分析 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-74页 |
| 2.1 P2与兔肝、脾、肾细胞结合的IFA鉴定 | 第60页 |
| 2.2 Co-IP筛选与RHDV P2蛋白相互作用的主要靶细胞蛋白 | 第60-62页 |
| 2.3 质谱鉴定 | 第62-64页 |
| 2.4 肝细胞中与P2蛋白相互作用蛋白的生物信息学分析 | 第64-67页 |
| 2.5 脾细胞中与P2蛋白相互作用蛋白的生物信息学分析 | 第67-71页 |
| 2.6 肾细胞中与P2蛋白相互作用蛋白的生物信息学分析 | 第71-74页 |
| 2.6.1 GO 注释 | 第71-73页 |
| 2.6.2 P2相互作用蛋白的KOG分析 | 第73-74页 |
| 2.6.3 P2相互作用肾蛋白的KEGG分析 | 第74页 |
| 3 讨论 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 第三章 LamR与RHDV及其蛋白相互作用的初步鉴定 | 第81-97页 |
| 1 试验材料与方法 | 第82-86页 |
| 1.1 载体、蛋白、菌株及细胞及试剂 | 第82页 |
| 1.2 激光共聚焦鉴定肝、脾细胞中LamR与P2的共定位 | 第82-83页 |
| 1.3 LamR基因扩增 | 第83-84页 |
| 1.4 pGEX-6p-1-LamR重组表达载体的构建 | 第84页 |
| 1.5 GST-LamR重组蛋白诱导表达条件探索 | 第84页 |
| 1.6 GST-LamR重组蛋白的鉴定 | 第84页 |
| 1.7 P2蛋白与GST-LamR蛋白的体外pull-down实验 | 第84-85页 |
| 1.8 GST-LamR重组蛋白表达纯化 | 第85页 |
| 1.9 IFA鉴定GST-LamR对P2与原代肝细胞结合的阻断 | 第85-86页 |
| 1.10 激光共聚焦鉴定LamR与RHDV的体外共定位 | 第86页 |
| 1.11 激光共聚焦鉴定LamR与RHDV感染兔肝细胞的体内共定位 | 第86页 |
| 2 结果 | 第86-92页 |
| 2.1 激光共聚焦鉴定兔肝细胞、脾细胞上LamR与P2的共定位 | 第86-87页 |
| 2.2 pGEX-6p-1-LamR重组表达载体的构建 | 第87-88页 |
| 2.3 LamR重组蛋白的表达 | 第88-89页 |
| 2.4 GST-LamR重组蛋白的鉴定 | 第89页 |
| 2.5 P2蛋白与GST-LamR蛋白的体外pull-down实验 | 第89-90页 |
| 2.6 GST-LamR蛋白的纯化 | 第90页 |
| 2.7 IFA鉴定GST-LamR对P2与原代肝细胞结合的阻断 | 第90-91页 |
| 2.8 激光共聚焦鉴定肝细胞LamR与RHDV的体外共定位 | 第91-92页 |
| 2.9 激光共聚焦鉴定肝细胞LamR与RHDV感染兔肝细胞的体内共定位 | 第92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-97页 |
| 全文总结 | 第97-99页 |
| 附录 常用试剂的配制 | 第99-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第109页 |
