| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-25页 |
| 1 松花粉和多糖 | 第13页 |
| 2 多糖的功能 | 第13-15页 |
| 2.1 多糖具有免疫促进活性 | 第13-14页 |
| 2.2 多糖具有抗病毒活性 | 第14页 |
| 2.3 多糖具有抗肿瘤活性 | 第14-15页 |
| 2.4 多糖具有抗衰老作用 | 第15页 |
| 2.5 多糖具有降血糖和降血脂的功效 | 第15页 |
| 3 多糖的荧光标记 | 第15-17页 |
| 3.1 常用的荧光染料 | 第15-16页 |
| 3.2 常见的多糖的荧光标记 | 第16-17页 |
| 4 多糖与TLR4受体的作用 | 第17-21页 |
| 4.1 主要的TLR4信号通路 | 第17-18页 |
| 4.2 各种多糖与TLR4的作用 | 第18-21页 |
| 5 细胞的内吞途径 | 第21-22页 |
| 6 本课题的研究基础、研究的目的及研究意义 | 第22-25页 |
| 第二章 马尾松花粉多糖的提取与检测 | 第25-30页 |
| 1 材料与试剂 | 第25页 |
| 2 仪器与设备 | 第25-26页 |
| 3 实验步骤 | 第26-27页 |
| 3.1 破壁马尾松花粉多糖的提取 | 第26页 |
| 3.2 破壁马尾松花粉中多糖含量的测定 | 第26-27页 |
| 4 实验结果 | 第27-29页 |
| 4.1 马尾松花粉多糖得率 | 第27-28页 |
| 4.2 PPM60全波长扫描 | 第28页 |
| 4.3 多糖含量的测定 | 第28-29页 |
| 5 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 马尾松花粉多糖的荧光标记及检测 | 第30-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第30页 |
| 2 仪器与设备 | 第30-31页 |
| 3 实验步骤 | 第31-33页 |
| 3.1 松花粉多糖的荧光标记 | 第31-32页 |
| 3.2 PPM60-Tyr-FITC的纯化 | 第32页 |
| 3.3 PPM60-Tyr-FITC的荧光取代度的测定 | 第32-33页 |
| 4 实验结果 | 第33-38页 |
| 4.1 酪胺标记到多糖上 | 第33-34页 |
| 4.2 FITC的标记结果 | 第34-35页 |
| 4.3 苯酚-硫酸法 490 nm下测多糖 | 第35页 |
| 4.4 荧光分光光度计测荧光吸收值 | 第35-36页 |
| 4.5 荧光峰与多糖峰的对应 | 第36页 |
| 4.6 PPM60-Tyr-FITC的纯化 | 第36-37页 |
| 4.7 PPM60-Tyr-FITC的取代度测定 | 第37-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 PPM60-Tyr-FITC对细胞活性的影响 | 第40-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第40页 |
| 1.1 实验动物及细胞系 | 第40页 |
| 1.2 实验材料 | 第40页 |
| 2 仪器与设备 | 第40-41页 |
| 3 试剂配制 | 第41页 |
| 3.1 DMEM完全细胞培养液的配制 | 第41页 |
| 3.2 胎牛血清的处理 | 第41页 |
| 3.3 MTT作用液的配制 | 第41页 |
| 4 方法步骤 | 第41-42页 |
| 4.1 RAW264.7 细胞的培养 | 第41页 |
| 4.2 IEC-6 细胞的培养 | 第41页 |
| 4.3 MTT法测定PPM60、PPM60-Tyr、PPM60-Tyr-FITC对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响 | 第41-42页 |
| 4.4 MTT法测定PPM60、PPM60-Tyr、PPM60-Tyr-FITC对IEC-6 细胞活性的影响 | 第42页 |
| 4.5 统计学处理 | 第42页 |
| 5 实验结果 | 第42-44页 |
| 5.1 PPM60、PPM60-Tyr、PPM60-Tyr-FITC对小鼠巨噬细胞RAW264.7 活性的影响 | 第42-43页 |
| 5.2 PPM60、PPM60-Tyr、PPM60-Tyr-FITC对IEC-6 细胞活性影响 | 第43-44页 |
| 6 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 荧光标记多糖与巨噬细胞RAW264.7 的受体TLR4的作用 | 第45-62页 |
| 1 材料与试剂 | 第45-46页 |
| 1.1 实验用细胞系 | 第45页 |
| 1.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 2 仪器与设备 | 第46页 |
| 3 试剂配制 | 第46页 |
| 3.1 细胞培养液的配制 | 第46页 |
| 3.2 胎牛血清的处理 | 第46页 |
| 3.3 荧光多糖培养液的配制 | 第46页 |
| 3.4 抑制剂的配制 | 第46页 |
| 4 方法与步骤 | 第46-49页 |
| 4.1 FCM观察PPM60-Tyr-FITC与RAW264.7 细胞的作用 | 第46-47页 |
| 4.2 观察各时间点标准品PPM60-Tyr-FITC与RAW264.7 细胞的作用 | 第47页 |
| 4.3 用标准品FITC-dextran探讨各时间点多糖与RAW264.7 的作用关系 | 第47页 |
| 4.4 短时间内用CLSM观察FITC-dextran进入细胞后荧光的变化 | 第47-49页 |
| 4.5 FCM及CLSM检测PPM60-Tyr-FITC与细胞的作用情况 | 第49页 |
| 5 实验结果 | 第49-59页 |
| 5.1 FCM观察PPM60-Tyr-FITC与RAW264.7 细胞的作用 | 第49-50页 |
| 5.2 CLSM观察各时间点荧光标记多糖与RAW264.7 细胞的作用 | 第50-51页 |
| 5.3 FCM检测各时间段微丝抑制剂CB和TLR4抑制剂TAK-242对FITC-dextran进入RAW264.7 细胞的影响 | 第51-53页 |
| 5.4 免疫荧光法研究FITC-dextran进入RAW264.7 细胞后荧光的变化 | 第53-55页 |
| 5.5 FCM检测 20 min时Pitstop 2 和TAK-242对FITC-dextran进入RAW264.7 细胞的影响 | 第55-57页 |
| 5.6 PPM60-Tyr-FITC进入RAW264.7 细胞后荧光的变化结果 | 第57-59页 |
| 6 讨论 | 第59-62页 |
| 第六章 荧光标记多糖与IEC-6 的受体TLR4的作用 | 第62-73页 |
| 1 器材与试剂 | 第62-63页 |
| 1.1 实验用细胞系 | 第62页 |
| 1.2 实验材料 | 第62-63页 |
| 2 实验仪器 | 第63页 |
| 3 试剂配制 | 第63页 |
| 3.1 细胞培养液的配制 | 第63页 |
| 3.2 胎牛血清的处理 | 第63页 |
| 3.3 荧光多糖培养液的配制 | 第63页 |
| 3.4 抑制剂的配制 | 第63页 |
| 4 方法与步骤 | 第63-65页 |
| 4.1 FCM分析荧光标记多糖与大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6 的作用关系 | 第63-64页 |
| 4.2 CLSM观察FITC-dextran或PPM60-Tyr-FITC进入细胞后荧光的变化 | 第64-65页 |
| 4.3 CLSM观察各组的情况 | 第65页 |
| 4.4 FCM及CLSM检测PPM60与细胞的作用情况 | 第65页 |
| 5 实验结果 | 第65-71页 |
| 5.1 FITC-dextran进入IEC-6 细胞后荧光的变化 | 第65-68页 |
| 5.2 PPM60-Tyr-FITC进入IEC-6 细胞后荧光的变化 | 第68-71页 |
| 6 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 硕士研究生期间发表文章 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
