| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1、文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 植物NMD受PTC位置影响 | 第11-12页 |
| 1.1.1 NMD的保守性和靶基因的不保守性 | 第11页 |
| 1.1.2 PTC位置能够影响NMD效率 | 第11-12页 |
| 1.2 Upf1负责激活真核生物中的NMD | 第12-13页 |
| 1.3 植物NMD可选途径 | 第13-15页 |
| 1.4 SR蛋白家族和胁迫响应 | 第15页 |
| 1.5 Upf蛋白对生物和非生物胁迫具有抗性 | 第15-18页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2、SiUPF3基因的生物信息学和表达模式分析 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第19页 |
| 2.2 实验设备和软件 | 第19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.3.1 SiUPF3基因的生物信息学分析 | 第19-21页 |
| 2.3.2 SiUPF3基因的表达模式分析 | 第21-23页 |
| 2.4 SiUPF3生物信息学分析结果 | 第23-29页 |
| 2.4.1 SiUPF3基因的序列分析 | 第23-25页 |
| 2.4.2 SiUPF3蛋白的二级结构 | 第25-27页 |
| 2.4.3 SiUPF3的家族蛋白分析及系统进化树分析 | 第27-28页 |
| 2.4.4 SiUPF3基因的启动子预测分析 | 第28-29页 |
| 2.5 表达模式分析结果 | 第29-33页 |
| 2.5.1 SiUPF3基因在PEG诱导下的表达模式分析 | 第29-31页 |
| 2.5.2 SiUPF3基因在ABA胁迫下的表达模式分析 | 第31-33页 |
| 2.6 讨论 | 第33-34页 |
| 2.7 小结 | 第34-35页 |
| 3、耐旱基因SiUPF3表达载体的构建和烟草转化 | 第35-49页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.2 试验仪器 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-45页 |
| 3.2.1 谷子材料的种植及RNA的提取、cDNA的合成 | 第36页 |
| 3.2.2 RNA的提取 | 第36页 |
| 3.2.3 cDNA的获得 | 第36页 |
| 3.2.4 SiUPF3基因的克隆 | 第36-41页 |
| 3.2.5 pTF101-35s-SiUPF3表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.6 pTF101.1-35s-SiUPF3质粒转化GV3101农杆菌 | 第42-43页 |
| 3.2.7 pTF101.1-35s-SiUPF3的农杆菌工程菌株侵染烟草植株 | 第43-44页 |
| 3.2.8 转基因烟草的筛选及植株再生 | 第44页 |
| 3.2.9 转基因烟草的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3 结果 | 第45-48页 |
| 3.3.1 SiUPF3 | 第45页 |
| 3.3.2 pTF101.1-35s-SiUPF3表达载体 | 第45-46页 |
| 3.3.3 含有表达载体的农杆菌工程菌株鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.4 转基因烟草过表达株系的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 4 、耐旱基因SiUPF3的亚细胞定位 | 第49-59页 |
| 4.1 实验材料和试剂 | 第49页 |
| 4.2 实验仪器 | 第49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-53页 |
| 4.3.1 瞬时表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 4.3.2 SiUPF3基因的亚细胞定位分析 | 第51-53页 |
| 4.4 结果与分析 | 第53-58页 |
| 4.4.1 瞬时表达载体 | 第53-55页 |
| 4.4.2 亚细胞定位 | 第55-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58页 |
| 4.6 小结 | 第58-59页 |
| 5、SiUPF3转基因烟草TO代植株的生理特征分析 | 第59-67页 |
| 5.1 试验材料 | 第59-60页 |
| 5.1.1 SOD的检测试剂配制 | 第59-60页 |
| 5.1.2 MDA含量检测试剂的配制 | 第60页 |
| 5.1.3 脯氨酸含量检测试剂的配制 | 第60页 |
| 5.2 试验方法 | 第60-62页 |
| 5.2.1 烟草植株的处理 | 第60页 |
| 5.2.2 SOD的测定 | 第60-61页 |
| 5.2.3 MDA的测定 | 第61页 |
| 5.2.4 脯氨酸含量的测定 | 第61-62页 |
| 5.3 结果 | 第62-66页 |
| 5.3.1 SiUPF3转基因的烟草植株的获得 | 第62-63页 |
| 5.3.2 SiUPF3转基因烟草T0代植株生理分析 | 第63-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66页 |
| 5.5 小结 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录A 荧光定量比较Ct值法测定相对表达量 | 第76-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
