| 摘要 | 第6-10页 |
| ABSTRACT | 第10-15页 |
| 符号说明 | 第16-22页 |
| 第1章 绪论：CD56~+T细胞与HBV临床治疗 | 第22-34页 |
| 1.1 HBV感染与治疗 | 第22-31页 |
| 1.1.1 HBV病毒学特征 | 第23页 |
| 1.1.2 HBV感染进程 | 第23-26页 |
| 1.1.3 HBV免疫应答 | 第26-29页 |
| 1.1.4 HBV免疫逃逸 | 第29页 |
| 1.1.5 HBV临床治疗 | 第29-31页 |
| 1.2 CD56~+T细胞 | 第31-34页 |
| 1.2.1 CD56~+T细胞特征 | 第31-32页 |
| 1.2.2 CD56~+T细胞抗病毒研究 | 第32-34页 |
| 第2章 绪论：miRNA与NK细胞 | 第34-42页 |
| 2.1 NK细胞 | 第34-37页 |
| 2.2 microRNA | 第37-42页 |
| 2.2.1 miRNA基本特征 | 第37-38页 |
| 2.2.2 调控NK细胞的miRNA | 第38-42页 |
| 第3章 CD56~+T细胞与HBV病人干扰素治疗应答关系研究 | 第42-76页 |
| 3.1 引言 | 第42-44页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第44-48页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.2.1.1 临床标本 | 第44页 |
| 3.2.1.2 流式抗体 | 第44-45页 |
| 3.2.1.3 临床指标检测 | 第45-46页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 3.2.3.1 流式细胞术 | 第46页 |
| 3.2.3.2 分离外周血单个核细胞 | 第46页 |
| 3.2.3.3 胞内细胞因子检测 | 第46-47页 |
| 3.2.3.4 细胞脱颗粒能力检测 | 第47页 |
| 3.2.3.5 CD56~+T体外细胞因子刺激 | 第47页 |
| 3.2.3.6 CD56~+T体外靶细胞刺激 | 第47-48页 |
| 3.2.3.7 统计分析 | 第48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-71页 |
| 3.3.1 CHB病人优势表达CD3~(bright)CD56~+T细胞 | 第48-51页 |
| 3.3.1.1 CHB病人的CD56~+T细胞CD3平均荧光强度较高 | 第49-51页 |
| 3.3.1.2 CD3~(bright)CD56~+T和CD3~(dim)CD56~+T细胞的判断依据 | 第51页 |
| 3.3.2 表达CD3~(bright)CD56~+T细胞的CHB病人治疗效果不佳 | 第51-54页 |
| 3.3.2.1 经历完整peg-IFNct治疗的病人信息 | 第51-52页 |
| 3.3.2.2 含有CD3~(bright)CD56~+T细胞的CHB病人治疗效果较差 | 第52-54页 |
| 3.3.3 CD3~(bright)CD56~+T细胞处于被抑制性状态 | 第54-63页 |
| 3.3.3.1 CD3~(bright)CD56~+T细胞低表达功能性分子CD8 | 第54-57页 |
| 3.3.3.2 CD3~(bright)CD56~+T细胞高表达抑制性分子NKG2A | 第57-60页 |
| 3.3.3.3 CD3~(bright)CD56~+T细胞低表达抗病毒IFNγ和CD107a | 第60-63页 |
| 3.3.4 治疗过程中,TIM-3在CD3~(bright)CD56~+T细胞表达迅速上调 | 第63-64页 |
| 3.3.5 附表HBV治疗病人临床资料信息 | 第64-71页 |
| 3.4 讨论和总结 | 第71-76页 |
| 第4章 不同NK细胞亚群间miRNA芯片差异分析 | 第76-108页 |
| 4.1 引言 | 第76-77页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第77-90页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第77-81页 |
| 4.2.1.1 实验标本 | 第77-78页 |
| 4.2.1.2 分离外周血、脐带血、蜕膜组织单个核细胞 | 第78页 |
| 4.2.1.3 细胞培养 | 第78页 |
| 4.2.1.4 细胞系 | 第78页 |
| 4.2.1.5 细胞分选 | 第78页 |
| 4.2.1.6 流式细胞术抗体 | 第78-79页 |
| 4.2.1.7 流式检测细胞内分子 | 第79页 |
| 4.2.1.8 基因芯片 | 第79页 |
| 4.2.1.9 miRNA模拟体和抑制荆 | 第79页 |
| 4.2.1.10 双荧光素酶报告实验 | 第79页 |
| 4.2.1.11 细胞转染 | 第79页 |
| 4.2.1.12 RNA提取,miRNA的提取和检测以及荧光定量PCR | 第79-80页 |
| 4.2.1.13 Western blot | 第80-81页 |
| 4.2.1.14 NK细胞杀伤 | 第81页 |
| 4.2.1.15 ELISA检测IFNγ | 第81页 |
| 4.2.2 实验器材 | 第81-82页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第82-90页 |
| 4.2.3.1 外周血/脐带血单个核细胞的分离 | 第82页 |
| 4.2.3.2 蜕膜组织单个核细胞的分离 | 第82-83页 |
| 4.2.3.3 细胞分选 | 第83页 |
| 4.2.3.4 细胞培养 | 第83-84页 |
| 4.2.3.5 miRNA基因芯片检测 | 第84页 |
| 4.2.3.6 脂质体法细胞转染 | 第84页 |
| 4.2.3.7 双荧光素酶报告基因质粒构建 | 第84页 |
| 4.2.3.8 双荧光素酶报告基因检测系统验证靶基因 | 第84-85页 |
| 4.2.3.9 提取细胞总RNA、反转录和PCR检测mRNA表达 | 第85-86页 |
| 4.2.3.10 western检测蛋白表达 | 第86-87页 |
| 4.2.3.11 miRNA的提取及检测 | 第87-88页 |
| 4.2.3.11 流式细胞术检测细胞表面标志 | 第88页 |
| 4.2.3.12 流式细胞术检测细胞内细胞因子 | 第88页 |
| 4.2.3.13 ELISA检测IFNγ | 第88-89页 |
| 4.2.3.14 miRNA核转染 | 第89页 |
| 4.2.3.15 NK细胞的杀伤检测 | 第89-90页 |
| 4.2.3.16 NK细胞的脱颗粒能力检测 | 第90页 |
| 4.3 实验结果 | 第90-106页 |
| 4.3.1 miRNA的芯片谱系分析 | 第90-93页 |
| 4.3.1.1 淋巴细胞中miRNA的表达差异分析 | 第90-91页 |
| 4.3.1.2 NK细胞中普遍高表达的miRNA分析 | 第91-93页 |
| 4.3.2 NK细胞之间的miRNA表达谱系 | 第93-98页 |
| 4.3.2.1 NK细胞之间的miRNA表达谱系 | 第93-95页 |
| 4.3.2.2 miR-362-5p在pNK细胞中相对高表达 | 第95-98页 |
| 4.3.3 CYLD是miR-362-5p的靶基因 | 第98-100页 |
| 4.3.3.1 miR-362-5p直接作用于CYLD的3’UTR区域 | 第98-99页 |
| 4.3.3.2 CYLD作为miR-362-5p靶基因的验证 | 第99-100页 |
| 4.3.4 miR-362-5p调节NK细胞功能 | 第100-106页 |
| 4.3.4.1 过表达miR-362-5p促进NK细胞的效应功能 | 第100-104页 |
| 4.3.4.2 anti-miR-382-5p抑制NK细胞的效应功能 | 第104-106页 |
| 4.4 讨论和总结 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 攻读博士期间研究成果和参加的学术会议 | 第128页 |
