| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1. 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 天然橡胶的生物合成 | 第10-11页 |
| 1.2 橡胶生物合成关键酶 | 第11-14页 |
| 1.2.1 橡胶延伸因子(REF)和小橡胶粒子蛋白 | 第11-12页 |
| 1.2.2 HMG-CoA还原酶(HMGR) | 第12页 |
| 1.2.3 法尼基焦磷酸合成酶 | 第12-13页 |
| 1.2.4 橡胶转移酶 | 第13-14页 |
| 1.2.4.1 橡胶树转移酶HRT2基因转录因子的研究进展 | 第14页 |
| 1.3 茉莉酸的生物合成及生理功能 | 第14-15页 |
| 1.3.1 茉莉酸对植物次生代谢途径的调控 | 第14页 |
| 1.3.2 MYC转录因子 | 第14-15页 |
| 1.4 植物MADS-box基因研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.1 植物MADS-box的基因结构 | 第15-16页 |
| 1.4.2 MADS-box蛋白的转录调控机制 | 第16页 |
| 1.4.3 橡胶树中MADS蛋白的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 酵母杂交技术的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5.1 酵母双杂交原理 | 第17页 |
| 1.5.2 酵母双杂交应用 | 第17页 |
| 1.5.3 酵母单杂交 | 第17-18页 |
| 1.5.4 酵母单杂交的应用 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 1.7 技术路线 | 第20-21页 |
| 2. 方法 | 第21-38页 |
| 2.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.2 载体、质粒和菌种 | 第21-22页 |
| 2.3 酵母培养基 | 第22页 |
| 2.4 其他试剂 | 第22页 |
| 2.5 HbMADS3-2、HbFDPS、HbHRT2、HbSRPP在橡胶树热研8-79、PR107的基因表达 | 第22-26页 |
| 2.5.1 样品的采集 | 第22页 |
| 2.5.2 橡胶树总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.5.3 cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| 2.5.4 荧光定量PCR | 第24-26页 |
| 2.6 酵母单杂交表达载体pGADT7-HbMADS3-2的构建 | 第26-30页 |
| 2.6.1 5'-RACE | 第26-28页 |
| 2.6.2 HbMADS3-2全长cDNA的克隆 | 第28-29页 |
| 2.6.3 HbMADS3-2酵母单杂交表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.7 酵母单杂交点对点验证HbMADS3-2与HbHRT2、HbFDPS、HbSRPP之间的互作 | 第30-32页 |
| 2.7.1 酵母Y187感受态的制备 | 第30-31页 |
| 2.7.2 pGADT7-HbMADS3-2与HbHRT2、HbFDPS、HbSRPP共转化酵母感受态 | 第31-32页 |
| 2.8 不同激素处理对HbMADS3-2基因表达影响 | 第32页 |
| 2.8.1 材料的处理 | 第32页 |
| 2.8.2 不同处理下HbMADS3-2的基因表达 | 第32页 |
| 2.9 利用酵母双杂交筛选HblMYC3的互作蛋白 | 第32-37页 |
| 2.9.1 pGBKT7-HblMYC3酵母双杂交载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.9.2 胶乳cDNA文库的构建 | 第33-35页 |
| 2.9.3 诱饵载体pGBKT7-HblMYC3与胶乳cDNA文库双杂交 | 第35页 |
| 2.9.4 诱饵载体pGBKT7-HblMYC3自激活作用的鉴定 | 第35页 |
| 2.9.5 酵母菌阳性菌株的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.10 酵母单杂交点对点验证HblMYC3与橡胶转移酶基因HRT2启动子之间的互作 | 第37-38页 |
| 2.10.1 酵母单杂交载体pGADT7-HblMYC3的构建 | 第37页 |
| 2.10.2 双酶切、连接 | 第37页 |
| 2.10.3 pGADT7-HblMYC3与pHis2.1-HRT2点对点酵母单杂交 | 第37-38页 |
| 3. 结果 | 第38-51页 |
| 3.1 HbMADS3-2酵母单杂表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 3.1.1 HbMADS3-2、HbFDPS、HbHRT2、HbSRPP在橡胶树热研8-79、PR107的基因表达 | 第38-39页 |
| 3.1.2 5'RACE扩增 | 第39页 |
| 3.1.3 HbMADS3-2全长cDNA的扩增 | 第39页 |
| 3.1.4 HbMADS3-2的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.1.5 HbMADS3-2分子进化树分析 | 第41页 |
| 3.2 HbMADS3-2基因表达分析 | 第41-43页 |
| 3.2.1 HbMADS3-2基因在不同组织中的表达分析 | 第41-42页 |
| 3.2.2 不同激素处理对HbMADS3-2表达的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 酵母单杂点对点验证HbMADS3-2与HbHRT2、HbFDPS、HbSRPP之间的互作关系 | 第43-46页 |
| 3.3.1 HbHRT2、HbFDPS、HbSRPP启动子元件分析 | 第43页 |
| 3.3.2 pGADT7-HbMADS3-2酵母单杂表达载体的构建 | 第43页 |
| 3.3.3 HbMADS3-2和HbHRT2、HbFDPS、HbSRPP点对点酵母单杂交 | 第43-46页 |
| 3.4 酵母双杂筛选互作蛋白HblMYC3 | 第46-49页 |
| 3.4.1 重组pGBKT7-HblMYC3诱饵表达载体构建与验证 | 第46页 |
| 3.4.2 重组质粒pGBKT7-HblMYC3自激活检测 | 第46-47页 |
| 3.4.3 HbIMYC3酵母菌文库的筛选及侯选质粒的分离 | 第47-48页 |
| 3.4.4 HbIMYC3酵母菌文库侯选蛋白的测序及分析 | 第48-49页 |
| 3.5 酵母单杂点对点验证HblMYC3是否为HbHRT2转录因子 | 第49-51页 |
| 3.5.1 酵母单杂表达载体pGADT7-HblMYC3的构建与验证 | 第49页 |
| 3.5.2 HblMYC3、HbHbHRT2点对点酵母单杂交 | 第49-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| 4.1 HbHRT2的差异表达可能与橡胶合成效率高低有关 | 第51页 |
| 4.2 HbMADS3-2在乳管细胞中大量表达,而且受茉莉酸上调表达,可能与橡胶合成调控有关 | 第51-52页 |
| 4.3 HbHRT2的转录受多个转录因子调节,这些转录因子可能形成一个复合体,介导乙烯和茉莉酸信号途径对天然橡胶生物合成的调节 | 第52-53页 |
| 5. 结论 | 第53页 |
| 6. 创新 | 第53页 |
| 7. 后续研究 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
