| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 主要仪器 | 第12-13页 |
| 注释说明清单 | 第13-16页 |
| 引言 | 第16-19页 |
| 第一部分 粉尘螨1类变应原T细胞表位重组蛋白的构建及鉴定 | 第19-39页 |
| 1 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.1 合成基因 | 第19页 |
| 1.2 设计引物 | 第19页 |
| 1.3 构建重组表达质粒 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-25页 |
| 2.1 主要试剂 | 第20-22页 |
| 2.2 主要试剂配制 | 第22-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-33页 |
| 3.1 Derf1T细胞表位嵌合基因的制备 | 第25页 |
| 3.2 重组表达质粒的构建 | 第25页 |
| 3.3 重组质粒的提取 | 第25-26页 |
| 3.4 重组质粒双酶切鉴定 | 第26页 |
| 3.5 E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第26-27页 |
| 3.6 菌落PCR验证 | 第27-28页 |
| 3.7 DNA测序测定 | 第28页 |
| 3.8 Derf1,Derf1T蛋白的小量诱导表达 | 第28-29页 |
| 3.9 Derf1,Derf1T蛋白的SDS-PAGE分析 | 第29-30页 |
| 3.10 Derf1,Derf1T蛋白的大剂量诱导表达 | 第30页 |
| 3.11 Derf1,Derf1T蛋白的纯化及鉴定 | 第30-31页 |
| 3.12 纯化产物的免疫印记(western blot)分析 | 第31-32页 |
| 3.13 患者血清IgE结合活性检测 | 第32-33页 |
| 4 结果 | 第33-38页 |
| 4.1 PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| 4.2 重组质粒鉴定 | 第34-35页 |
| 4.3 重组蛋白表达与纯化 | 第35-36页 |
| 4.4 免疫印迹实验鉴定Western blotting | 第36-37页 |
| 4.5 Derf1T对患者血清IgE结合力 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38-39页 |
| 第二部分 Derf1的T细胞表位疫苗的治疗效果和对STAT4/STAT6信号通路的影响 | 第39-53页 |
| 1 研究内容 | 第39-40页 |
| 2 材料 | 第40-43页 |
| 2.1 实验动物 | 第40页 |
| 2.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 2.4 主要试剂配制 | 第42-43页 |
| 3 方法 | 第43-45页 |
| 3.1 建立哮喘小鼠模型 | 第43页 |
| 3.2 特异性免疫治疗 | 第43页 |
| 3.3 制备支气管肺泡灌洗液(BALF)并进行细胞因子检测 | 第43页 |
| 3.4 测定血清中特异性IgE(sIgE)和IgG2a水平 | 第43页 |
| 3.5 培养脾细胞并测定培养上清中细胞因子水平 | 第43-44页 |
| 3.6 制作肺组织病理切片 | 第44页 |
| 3.7 提取肺组织蛋白 | 第44页 |
| 3.8 Western bloting分析 | 第44页 |
| 3.9 统计学分析 | 第44-45页 |
| 4 结果 | 第45-51页 |
| 4.1 肺组织病理切片检查结果 | 第45-46页 |
| 4.2 BALF中嗜酸性粒细胞计数 | 第46-47页 |
| 4.3 BALF中细胞因子IL-13和IFN-γ含量测定 | 第47-48页 |
| 4.4 血清中特异性IgE(sIgE)和IgG2a水平测定 | 第48-49页 |
| 4.5 脾细胞培养上清中IL-13和IFN-γ含量测定 | 第49-50页 |
| 4.6 肺组织中STAT4/STAT6蛋白表达变化 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
