| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 本论文所用英文缩写单词表 | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 RNA的检测意义 | 第12-17页 |
| 1.2 荧光共振能量转移(FRET)技术概述 | 第17-24页 |
| 1.2.1 荧光共振能量转移原理 | 第17-18页 |
| 1.2.2 FRET核酸荧光分子探针在核酸检测中的应用 | 第18-24页 |
| 1.2.2.1 FRET核酸荧光分子探针用于细胞外核酸的检测 | 第18-21页 |
| 1.2.2.2 FRET核酸荧光分子探针用于细胞内核酸的检测 | 第21-24页 |
| 1.3 本文拟开展的研究工作 | 第24-25页 |
| 第2章 MnO_2纳米片介导的“DD-A”FRET二元探针用于细胞内mRNA检测 | 第25-42页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验部分 | 第26-31页 |
| 2.2.1 主要试剂和仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.2 缓冲溶液的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.3 细胞的培养 | 第28页 |
| 2.2.4 MnO_2纳米片的制备与表征 | 第28-29页 |
| 2.2.5 纳米探针的制备 | 第29页 |
| 2.2.6 荧光淬灭及恢复实验 | 第29页 |
| 2.2.7 荧光实验 | 第29页 |
| 2.2.8 细胞激光共聚焦成像分析 | 第29-30页 |
| 2.2.8.1 四组纳米探针的共聚焦成像对比分析 | 第29-30页 |
| 2.2.8.2 荧光共定位成像及探针特异性分析 | 第30页 |
| 2.2.8.3 药物刺激后细胞荧光成像分析 | 第30页 |
| 2.2.9 流式细胞分析 | 第30页 |
| 2.2.10 MnO_2纳米片的细胞毒性考察 | 第30页 |
| 2.2.11 实时荧光定量PCR分析 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-40页 |
| 2.3.1 实验原理 | 第31页 |
| 2.3.2 MnO_2纳米片的表征 | 第31-32页 |
| 2.3.3 荧光淬灭及恢复实验 | 第32-33页 |
| 2.3.4 反应时间的考察 | 第33-34页 |
| 2.3.5 标记荧光染料的数目对FRET信号影响的考察 | 第34页 |
| 2.3.6 体外标准工作曲线的绘制 | 第34-35页 |
| 2.3.7 细胞激光共聚焦成像分析 | 第35-40页 |
| 2.3.7.1 四组纳米探针的共聚焦成像对比分析 | 第35-37页 |
| 2.3.7.2 荧光共定位成像及探针特异性分析 | 第37-38页 |
| 2.3.7.3 药物刺激后细胞内TK1 mRNA变化的检测 | 第38-40页 |
| 2.3.8 MnO_2纳米片的细胞毒性考察 | 第40页 |
| 2.4 小结 | 第40-42页 |
| 第3章 MnO_2纳米片介导的“DD-A”HCR核酸探针用于细胞内miRNA检测 | 第42-57页 |
| 3.1 前言 | 第42页 |
| 3.2 实验部分 | 第42-46页 |
| 3.2.1 主要试剂和仪器 | 第42-44页 |
| 3.2.2 缓冲溶液的配制 | 第44页 |
| 3.2.3 细胞的培养 | 第44页 |
| 3.2.4 MnO_2纳米片的制备与表征 | 第44-45页 |
| 3.2.5 电泳分析 | 第45页 |
| 3.2.6 纳米探针的制备 | 第45页 |
| 3.2.7 荧光淬灭及恢复实验 | 第45页 |
| 3.2.8 荧光实验 | 第45-46页 |
| 3.2.9 细胞激光共聚焦成像分析 | 第46页 |
| 3.2.9.1 纳米探针在细胞内的最佳反应时间考察 | 第46页 |
| 3.2.9.2 细胞内实验可行性分析 | 第46页 |
| 3.2.9.3 特异性考察及两组纳米探针成像对比分析 | 第46页 |
| 3.2.10 MnO_2纳米片的细胞毒性考察 | 第46页 |
| 3.2.11 实时荧光定量PCR分析 | 第46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-55页 |
| 3.3.1 实验原理 | 第46-47页 |
| 3.3.2 MnO_2纳米片的表征 | 第47-48页 |
| 3.3.3 荧光淬灭及恢复实验 | 第48-49页 |
| 3.3.4 实验原理的可行性分析 | 第49-50页 |
| 3.3.5 实验最佳反应时间考察 | 第50页 |
| 3.3.6 体外标准工作曲线的绘制 | 第50-51页 |
| 3.3.7 共聚焦实验分析 | 第51-55页 |
| 3.3.7.1 探针在细胞中反应最佳时间考察 | 第51-52页 |
| 3.3.7.2 细胞内实验可行性分析 | 第52-53页 |
| 3.3.7.3 特异性考察及两组纳米探针成像对比分析 | 第53-55页 |
| 3.3.8 MnO_2纳米片的细胞毒性考察 | 第55页 |
| 3.4 小结 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-70页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
