| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第1章 综述 | 第10-23页 |
| 1.1 研究背景 | 第10页 |
| 1.2 核酸酶概述 | 第10-13页 |
| 1.3 常见的核糖核酸酶 | 第13-15页 |
| 1.3.1 牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase) | 第13页 |
| 1.3.2 牛精核糖核酸酶(BS RNase) | 第13-14页 |
| 1.3.3 血管生成素 | 第14-15页 |
| 1.3.4 Onconase | 第15页 |
| 1.4 Onconase的特性 | 第15-20页 |
| 1.4.1 Onconase结构特点 | 第15-16页 |
| 1.4.2 Onconase稳定性 | 第16-17页 |
| 1.4.3 Onconase催化活性 | 第17页 |
| 1.4.4 Onconase进入细胞的途径 | 第17-18页 |
| 1.4.5 Onconase细胞毒性与抗肿瘤活性 | 第18-19页 |
| 1.4.6 Onconase的免疫原性 | 第19-20页 |
| 1.5 Onconase与细胞凋亡 | 第20-23页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第23-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 所用质粒与菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 细胞与培养细胞所用试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 实验所用试剂与试剂盒 | 第23页 |
| 2.1.4 实验用仪器 | 第23页 |
| 2.1.5 所用培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.6 所用溶液及缓冲液 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 制备感受态 | 第26页 |
| 2.2.2 转化感受态与保藏菌种 | 第26-27页 |
| 2.2.3 质粒的抽提 | 第27页 |
| 2.2.4 蛋白质电泳方法(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳) | 第27-28页 |
| 2.2.5 Western Blot | 第28页 |
| 2.2.6 定蛋白浓度(主要用Brandford法) | 第28页 |
| 2.2.7 Onconase的表达 | 第28-29页 |
| 2.2.8 菌体破碎及包涵体的洗涤 | 第29页 |
| 2.2.9 包涵体蛋白的溶解和复性 | 第29-30页 |
| 2.2.10 Onconase的分离与纯化 | 第30页 |
| 2.2.11 荧光底物法测定蛋白酶活力 | 第30页 |
| 2.2.12 MTT法检测蛋白的细胞毒性 | 第30-31页 |
| 2.2.13 细胞凋亡的检测 | 第31-32页 |
| 第3章 Onconase纯化工艺的研究 | 第32-44页 |
| 3.1 Onconase的表达 | 第32-33页 |
| 3.2 菌体的发酵 | 第33-35页 |
| 3.3 包涵体的洗涤 | 第35-36页 |
| 3.4 包涵体复性条件的优化 | 第36-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 Onconase分离纯化,细胞毒性检测及促进肿瘤细胞的凋亡机理的研究 | 第44-53页 |
| 4.1 Onconase的分离纯化 | 第44-47页 |
| 4.1.1 酸沉法所得Onconase的分离纯化 | 第44页 |
| 4.1.2 精氨酸加入复性所得Onconase的分离纯化 | 第44-45页 |
| 4.1.3 2M尿素加入复性所得Onconase的分离纯化 | 第45-46页 |
| 4.1.4 1.5M尿素加入复性所得Onconase的分离纯化 | 第46-47页 |
| 4.2 各复性体系纯化所得Onconase的电泳及免疫印迹图像 | 第47-48页 |
| 4.3 蛋白回收率的测定 | 第48-49页 |
| 4.4 Onconase的细胞毒性检测 | 第49-51页 |
| 4.5 Onconase促进肿瘤细胞的凋亡机理的研究 | 第51-52页 |
| 4.6 本章小结 | 第52-53页 |
| 第5章 结论与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
