| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-43页 |
| 1.1 伪狂犬病流行病学 | 第16-19页 |
| 1.1.1 伪狂犬病的认识历程 | 第16-17页 |
| 1.1.2 伪狂犬病世界流行动态 | 第17页 |
| 1.1.3 伪狂犬病流行病学 | 第17-19页 |
| 1.2 伪狂犬病病毒的生物学特征 | 第19-22页 |
| 1.2.1 伪狂犬病病毒是疱疹病毒科成员 | 第19-20页 |
| 1.2.2 伪狂犬病病毒的形态和特性 | 第20-21页 |
| 1.2.3 伪狂犬病病毒的生态学 | 第21页 |
| 1.2.4 伪狂犬病病毒的传播 | 第21-22页 |
| 1.2.5 伪狂犬病病毒的培养 | 第22页 |
| 1.3 伪狂犬病病毒分子生物学 | 第22-31页 |
| 1.3.1 伪狂犬病病毒基因组 | 第23-24页 |
| 1.3.2 伪狂犬病病毒编码的蛋白质 | 第24-31页 |
| 1.4 伪狂犬病病毒致病机理 | 第31-36页 |
| 1.4.1 病毒囊膜蛋白 | 第31-35页 |
| 1.4.2 病毒编码的酶 | 第35页 |
| 1.4.3 病毒的潜伏感染 | 第35页 |
| 1.4.4 病毒引起的细胞凋亡 | 第35-36页 |
| 1.5 伪狂犬病病毒疫苗 | 第36-39页 |
| 1.5.1 自然弱毒疫苗 | 第36页 |
| 1.5.2 亚单位疫苗 | 第36-37页 |
| 1.5.3 核酸疫苗 | 第37页 |
| 1.5.4 重组疫苗 | 第37页 |
| 1.5.5 基因缺失疫苗 | 第37-39页 |
| 1.6 伪狂犬病的净化根除 | 第39-40页 |
| 1.7 Nectin蛋白简述 | 第40-42页 |
| 1.7.1 细胞粘附分子 | 第40页 |
| 1.7.2 Nectin家族 | 第40-41页 |
| 1.7.3 Nectin家族分子功能 | 第41页 |
| 1.7.4 Nectin-1 | 第41-42页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第42-43页 |
| 第二章 猪伪狂犬病病毒与细胞受体结合特性的研究 | 第43-61页 |
| 前言 | 第43-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第44-55页 |
| 2.1.1 质粒 | 第44页 |
| 2.1.2 载体、菌株、细胞以及毒株 | 第44页 |
| 2.1.3 引物设计及合成 | 第44-45页 |
| 2.1.4 主要生化试剂及耗材 | 第45-46页 |
| 2.1.5 常用溶液及配方 | 第46-48页 |
| 2.1.6 常用仪器 | 第48-49页 |
| 2.1.7 猪Nectin-1基因亚克隆 | 第49-53页 |
| 2.1.8 PRV侵入宿主细胞实验 | 第53-54页 |
| 2.1.9 PRV病毒侵入模拟实验 | 第54-55页 |
| 2.2 结果 | 第55-58页 |
| 2.2.1 猪Nectin-1基因的亚克隆 | 第55页 |
| 2.2.2 pcDNA4.0-Swine-Nectin-1质粒PCR以及双酶切鉴定 | 第55-57页 |
| 2.2.3 PRV可用人和猪的Nectin-1受体而不能用HVEM受体侵入细胞 | 第57页 |
| 2.2.4 PRV病毒膜融合实验 | 第57-58页 |
| 2.3 讨论 | 第58-60页 |
| 2.4 小结 | 第60-61页 |
| 第三章 表面等离子共振技术(SPR)测定PRV gD与Nectin-1亲和力 | 第61-93页 |
| 前言 | 第61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第61-80页 |
| 3.1.1 质粒 | 第61-62页 |
| 3.1.2 载体、菌株以及细胞 | 第62-63页 |
| 3.1.3 引物设计及合成 | 第63-64页 |
| 3.1.4 主要生化试剂及耗材 | 第64-65页 |
| 3.1.5 常用溶液及配方 | 第65-71页 |
| 3.1.6 常用仪器 | 第71-72页 |
| 3.1.7 基因亚克隆 | 第72-75页 |
| 3.1.8 pFastBac1-PRV gD337、pFastBac1-PRV gD284质粒重组Bacmid | 第75-78页 |
| 3.1.9 SPR测定PRV gD与Nectin-1分子间亲和力 | 第78-80页 |
| 3.2 结果 | 第80-90页 |
| 3.2.1 pFastBac1-gD载体构建及鉴定 | 第80-82页 |
| 3.2.2 重组质粒转化DH10Bac细胞及阳性克隆鉴定 | 第82-83页 |
| 3.2.3 蛋白表达与纯化 | 第83-87页 |
| 3.2.4 蛋白体外结合检测(Survive) | 第87-89页 |
| 3.2.5 SPR测定PRV gD与Nectin-1分子间亲和力 | 第89-90页 |
| 3.3 讨论 | 第90-91页 |
| 3.4 小结 | 第91-93页 |
| 第四章 猪伪狂犬病病毒gD蛋白与受体Nectin-1相互作用的晶体学研究 | 第93-115页 |
| 前言 | 第93-94页 |
| 4.1 材料与方法 | 第94-98页 |
| 4.1.1 质粒 | 第94页 |
| 4.1.2 载体、菌株以及细胞 | 第94页 |
| 4.1.3 引物设计及合成 | 第94页 |
| 4.1.4 猪Nectin-1 IgV Domain亚克隆 | 第94-97页 |
| 4.1.5 Swine Nectin-1 IgV表达与纯化 | 第97页 |
| 4.1.6 gD蛋白的表达与纯化 | 第97页 |
| 4.1.7 晶体筛选 | 第97-98页 |
| 4.2 结果 | 第98-113页 |
| 4.2.1 pFastBac1-Swine-Nectin-1 IgV载体构建及鉴定 | 第98-99页 |
| 4.2.2 Nectin-1 IgV表达与纯化 | 第99页 |
| 4.2.3 PRV gD/Nectin-1复合物分离纯化 | 第99-101页 |
| 4.2.4 PRV gD、PRV gD/Nectin-1结晶筛选 | 第101页 |
| 4.2.5 晶体X射线衍射和数据收集 | 第101-102页 |
| 4.2.6 晶体结构解析(分子置换法) | 第102-104页 |
| 4.2.7 晶体结构分析 | 第104-106页 |
| 4.2.8 PRV gD284/Nectin-1 IgV复合物结构特点 | 第106-108页 |
| 4.2.9 PRV gD/Nectin-1复合物结构中Nectin-1结合面特点 | 第108-110页 |
| 4.2.10 PRV gD结合Nectin-1后发生的构象变化 | 第110-113页 |
| 4.3 讨论 | 第113-114页 |
| 4.3.1 解析PRV gD结构的意义 | 第113页 |
| 4.3.2 解析PRV gD/Nectin-1复合物结构的意义 | 第113-114页 |
| 4.4 小结 | 第114-115页 |
| 第五章 Nectin-1与猪伪狂犬病病毒gD蛋白相互作用关键氨基酸位点的研究 | 第115-128页 |
| 前言 | 第115页 |
| 5.1 材料与方法 | 第115-120页 |
| 5.1.1 质粒 | 第115-116页 |
| 5.1.2 主要生化试剂及耗材 | 第116-117页 |
| 5.1.3 常用溶液及仪器 | 第117页 |
| 5.1.4 Nectin-1氨基酸突变位点的选取 | 第117页 |
| 5.1.5 Nectin-1突变体真核表达载体的构建 | 第117-118页 |
| 5.1.6 Nectin-1突变体的表达 | 第118-119页 |
| 5.1.7 Nectin-1 WT及突变体包涵体的纯化 | 第119页 |
| 5.1.8 Nectin-1突变体与PRV gD亲和力分析 | 第119页 |
| 5.1.9 膜融合细胞模型的构建[163] | 第119-120页 |
| 5.2 结果 | 第120-125页 |
| 5.2.1 Nectin-1突变体蛋白的表达与纯化 | 第120-121页 |
| 5.2.2 Nectin-1突变体与PRV gD亲和力分析 | 第121-124页 |
| 5.2.3 Nectin-1突变体影响PRV病毒膜融合实验 | 第124页 |
| 5.2.4 影响PRV gD/Nectin-1结合的关键位点分析 | 第124-125页 |
| 5.2.5 关键氨基酸位点的结构分析 | 第125页 |
| 5.3 讨论 | 第125-126页 |
| 5.4 小结 | 第126-128页 |
| 全文结论 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第141页 |
