| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-28页 |
| 1.1 血管活性肠肽(VIP)和Humanin(HN)的研究现状 | 第11页 |
| 1.1.1 血管活性肠肽(VIP) | 第11页 |
| 1.1.2 HUMANIN(HN) | 第11页 |
| 1.2 血管活性肠肽(VIP)和Humanin(HN)的生物学作用及机制 | 第11-15页 |
| 1.2.1 VIP的生物学作用及机制 | 第11-14页 |
| 1.2.1.1 VIP对消化系肿瘤的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.1.2 VIP与呼吸系统疾病 | 第12-13页 |
| 1.2.1.3 VIP与神经系统疾病 | 第13-14页 |
| 1.2.2 HN的生物学作用和机制 | 第14-15页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第15-20页 |
| 1.3.1 用大肠杆菌进行基因表达的一般策略 | 第15-16页 |
| 1.3.2 影响基因重组蛋白质在大肠杆菌中表达的因素 | 第16-18页 |
| 1.3.2.1 影响转录水平的因素 | 第16页 |
| 1.3.2.2 影响翻译水平的因素 | 第16-18页 |
| 1.3.2.3 宿主的选择和培养条件的控制 | 第18页 |
| 1.3.3 外源蛋白在大肠杆菌中的表达形式 | 第18-20页 |
| 1.4 重组蛋白的包涵体体外复性研究 | 第20-23页 |
| 1.4.1 包涵体的形成与分离 | 第20-21页 |
| 1.4.2 包涵体的变性与体外复性 | 第21-23页 |
| 1.5 重组蛋白的分离纯化 | 第23-27页 |
| 1.5.1 层析技术 | 第24-27页 |
| 1.5.1.1 层析方法的选择 | 第24页 |
| 1.5.1.2 亲和层析 | 第24-25页 |
| 1.5.1.3 其他方法 | 第25-27页 |
| 本章小结 | 第27-28页 |
| 第二章 rhVIP-HN基因的克隆 | 第28-39页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.3 结果分析讨论 | 第35-38页 |
| 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 rhVIP-HN基因表达条件的研究 | 第39-45页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.1 培养基及试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 菌种活化 | 第40页 |
| 3.2.2 种子液的培养 | 第40页 |
| 3.2.3 发酵培养 | 第40-41页 |
| 3.2.4 包涵体的制备 | 第41页 |
| 3.2.5 粗制包涵体的洗涤 | 第41页 |
| 3.2.6 包涵体的溶解 | 第41-42页 |
| 3.3 分析方法 | 第42-43页 |
| 3.3.1 紫外分光光度计测菌体浓度 | 第42页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第42页 |
| 3.3.3 电泳条带扫描 | 第42-43页 |
| 3.4 结果分析讨论 | 第43-44页 |
| 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 rhVIP-HN的分离纯化与鉴定 | 第45-55页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第45-46页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第45-46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 分离缓冲液PH值的选择 | 第46页 |
| 4.2.2 先复性再分离(途径一) | 第46-47页 |
| 4.2.3 先分离后复性(途径二) | 第47页 |
| 4.2.4 复性和分离同时完成(途径三) | 第47页 |
| 4.2.5 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定rhVIP-HN | 第47-48页 |
| 4.3 结果及分析 | 第48-54页 |
| 4.3.1 分离缓冲液的PH | 第48页 |
| 4.3.2 甘油的添加对复性的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.3 目标蛋白的分离 | 第49-51页 |
| 4.3.4 三种复性分离途径的比较 | 第51-52页 |
| 4.3.5 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定RHVIP-HN | 第52-54页 |
| 本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 结论和建议 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
| 作者和导师简介 | 第67-68页 |
| 附件 | 第68-69页 |
