| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 牛副流感病毒3型分子结构及基因型 | 第13-15页 |
| 1.1.1 病毒的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 病毒的分子结构 | 第13-14页 |
| 1.1.3 病毒的基因型 | 第14-15页 |
| 1.2 病毒的流行病学及诊断 | 第15-17页 |
| 1.2.1 BPIV3的流行病学 | 第15-16页 |
| 1.2.2 种间传播 | 第16页 |
| 1.2.3 BPIV3的诊断 | 第16-17页 |
| 1.3 BPIV3致病机制、病理变化及免疫逃避 | 第17-19页 |
| 1.3.1 病毒的复制 | 第17-18页 |
| 1.3.2 病毒的致病机制 | 第18页 |
| 1.3.3 临床症状及组织病理变化 | 第18-19页 |
| 1.3.4 病毒的免疫逃避 | 第19页 |
| 1.4 BPIV3的预防及嵌合疫苗研究 | 第19-21页 |
| 1.4.1 病毒的治疗及预防 | 第19-20页 |
| 1.4.2 副流感病毒嵌合疫苗 | 第20-21页 |
| 1.5 反向遗传概述 | 第21-22页 |
| 1.6 副黏病毒的复制 | 第22页 |
| 1.6.1. 病毒的侵入 | 第22页 |
| 1.6.2 病毒的合成及释放 | 第22页 |
| 1.7 副黏病毒反向遗传策略研究 | 第22-25页 |
| 1.7.1 体外转录 | 第23页 |
| 1.7.2 体内转录 | 第23-24页 |
| 1.7.3 T7 RNA聚合酶拯救系统 | 第24页 |
| 1.7.4 RNA聚合酶II拯救系统 | 第24-25页 |
| 1.7.5 六碱基原则 | 第25页 |
| 1.8 副黏病毒反向遗传应用研究 | 第25-29页 |
| 1.8.1 基因功能研究 | 第26页 |
| 1.8.2 致病机理研究 | 第26-27页 |
| 1.8.3 弱毒疫苗制备 | 第27页 |
| 1.8.4 嵌合病毒研究 | 第27-28页 |
| 1.8.5 活载体疫苗研究 | 第28-29页 |
| 1.9 小结 | 第29页 |
| 1.10 本研究目的及意义 | 第29-31页 |
| 第二章 牛副流感病毒3型全基因组测序及进化分析 | 第31-47页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 病毒、细胞、菌株和载体 | 第31页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2.1.4 参考毒株 | 第32页 |
| 2.1.5 生物信息学软件 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 病毒分离与纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.2 引物设计及合成 | 第33页 |
| 2.2.3 RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.4 T-A克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.5 碱裂解法小量提取质粒 | 第35页 |
| 2.2.6 重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| 2.2.7 病毒TCID50鉴定及理化特性分析 | 第35-36页 |
| 2.2.8 血凝性实验 | 第36页 |
| 2.3 结果 | 第36-44页 |
| 2.3.1 噬斑纯化结果 | 第36-37页 |
| 2.3.2 RT-PCR扩增结果 | 第37页 |
| 2.3.3 NX49全基因组序列测定、同源性比较、进化树构建及抗原蛋白三级结构预测 | 第37-43页 |
| 2.3.4 病毒TCID50及理化特性分析结果 | 第43页 |
| 2.3.5 血凝实验结果 | 第43-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 牛副流感病毒3型全长质粒构建 | 第47-55页 |
| 3.1 BPIV3全长基因组克隆构建策略 | 第47-49页 |
| 3.2 材料 | 第49页 |
| 3.2.1 病毒、细胞、菌株和载体 | 第49页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第49页 |
| 3.3 方法 | 第49-51页 |
| 3.3.1 引物设计与合成 | 第49页 |
| 3.3.2 载体改造及全长质粒构建 | 第49-51页 |
| 3.4 结果 | 第51-54页 |
| 3.4.1 改造质粒鉴定结果 | 第51-52页 |
| 3.4.2 各片段扩增结果 | 第52-53页 |
| 3.4.3 全长克隆酶切鉴定结果 | 第53页 |
| 3.4.4 酶切位点改造测序峰值图 | 第53-54页 |
| 3.5 讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 辅助质粒的构建及鉴定 | 第55-61页 |
| 4.1 材料 | 第55页 |
| 4.1.1 细胞及质粒 | 第55页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 4.2 方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第55-56页 |
| 4.2.2 PCR扩增及纯化 | 第56页 |
| 4.2.3 辅助质粒构建 | 第56页 |
| 4.2.4 全长基因组克隆质粒及辅助质粒的大量制备 | 第56页 |
| 4.2.5 制备转染细胞 | 第56页 |
| 4.2.6 辅助质粒的转染及鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3 结果 | 第57-59页 |
| 4.3.1 辅助质粒PCR及双酶切鉴定 | 第57页 |
| 4.3.2 质粒浓度测定 | 第57-58页 |
| 4.3.3 RT-PCR检测结果 | 第58页 |
| 4.3.4 间接免疫荧光检测结果 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 全文结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 个人简历 | 第83页 |