聚磷相关基因的克隆、鉴定及高效聚磷工程菌株的构建
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| ·研究背景 | 第12-13页 |
| ·我国淡水水体污染现状 | 第12页 |
| ·水体富营养化及其成因 | 第12-13页 |
| ·除磷方法 | 第13-14页 |
| ·传统除磷方法 | 第13页 |
| ·新型除磷方法 | 第13-14页 |
| ·聚磷工程菌的研究 | 第14-16页 |
| ·聚磷菌与聚磷工程菌 | 第14页 |
| ·聚磷酶基因的改造 | 第14-15页 |
| ·解磷酶基因的改造 | 第15页 |
| ·磷酸盐转运系统改造 | 第15页 |
| ·ATP合成途径的改造 | 第15页 |
| ·聚磷菌改造中存在的问题 | 第15-16页 |
| ·腺苷酸激酶 | 第16-17页 |
| ·腺苷酸激酶分子生物学研究 | 第16-17页 |
| ·腺苷酸激酶与聚磷菌的改造 | 第17页 |
| ·研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| ·本论文的研究内容与技术路线 | 第18-20页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| ·技术路线图 | 第19-20页 |
| 第二章 腺苷酸激酶基因的克隆与序列分析 | 第20-31页 |
| ·材料与仪器 | 第20-21页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·NP1基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·E.coli JM110感受态的制备 | 第22页 |
| ·DNA片段的凝胶回收 | 第22-23页 |
| ·TA克隆及热击转化 | 第23页 |
| ·腺苷酸激酶基因(adk)的克隆 | 第23-24页 |
| ·腺苷酸激酶的测序及序列分析 | 第24页 |
| ·其它方法 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-30页 |
| ·腺苷酸激酶基因的克隆 | 第24-26页 |
| ·NP1腺苷酸激酶的序列比对 | 第26-27页 |
| ·NP1腺苷酸激酶二级结构分析 | 第27-29页 |
| ·NP1腺苷酸激酶三级结构分析 | 第29-30页 |
| ·小结与讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 腺苷酸激酶基因的原核表达及功能鉴定 | 第31-39页 |
| ·材料与仪器 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-35页 |
| ·原核表达载体构建示意图 | 第32页 |
| ·腺苷酸激酶原核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE | 第33-34页 |
| ·ATP标准品制备 | 第34页 |
| ·表达菌株ATP的提取 | 第34页 |
| ·HPLC检测ATP提取物 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·腺苷酸激酶原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·腺苷酸激酶的原核表达 | 第35-36页 |
| ·腺苷酸激酶基因功能鉴定 | 第36-38页 |
| ·小结与讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 高效聚磷工程菌株的创制 | 第39-51页 |
| ·材料与仪器 | 第39-40页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-45页 |
| ·载体构建示意图 | 第40页 |
| ·soe-PCR | 第40-42页 |
| ·pBBR1MCS-dld-adk的构建 | 第42-43页 |
| ·pBBR1MCS-DA-DP的构建 | 第43页 |
| ·NP1电转感受态的制备 | 第43-44页 |
| ·NP1的电转化 | 第44页 |
| ·NP1生长曲线的绘制 | 第44页 |
| ·磷酸盐标准曲线的绘制 | 第44页 |
| ·重组菌株聚磷能力的测定 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·dld-adk soe-PCR拼接 | 第45页 |
| ·dld-ppk soe-PCR拼接 | 第45-46页 |
| ·pBBR1MCS-dld-adk的构建 | 第46-47页 |
| ·pBBR1MCS-DA-DP的构建 | 第47页 |
| ·NP1重组菌株的筛选 | 第47-48页 |
| ·NP1重组菌株生长曲线的绘制 | 第48-49页 |
| ·NP1重组菌株聚磷能力的测定 | 第49页 |
| ·小结与讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 全文结论 | 第51-52页 |
| ·腺苷酸激酶基因的克隆及基因、基因产物的分析 | 第51页 |
| ·腺苷酸激酶基因的原核表达与基因功能鉴定 | 第51页 |
| ·高效聚磷工程菌株的构建及聚磷能力分析 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
