葡萄病毒A MP基因RNA干扰载体的构建及其鉴定
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| ·葡萄病毒A 及葡萄病毒病防控研究 | 第14-17页 |
| ·葡萄病毒病害 | 第14页 |
| ·葡萄病毒A（GVA） | 第14-16页 |
| ·葡萄病毒病防控研究现状 | 第16-17页 |
| ·RNAi 的作用机制及其应用 | 第17-21页 |
| ·RNAi 的发现 | 第17页 |
| ·RNAi 的机制 | 第17-18页 |
| ·RNAi 的特点 | 第18-19页 |
| ·RNAi 的应用 | 第19-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·试剂与材料 | 第22-25页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| ·培养基及试剂配制 | 第22-24页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·仪器设备 | 第24-25页 |
| ·研究方法 | 第25-36页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·MP 基因片段的克隆与序列测定 | 第26-29页 |
| ·干扰载体的构建 | 第29-32页 |
| ·干扰载体向农杆菌中的转化 | 第32-33页 |
| ·农杆菌渗入法介导的瞬时表达 | 第33页 |
| ·提取总RNA | 第33-34页 |
| ·反转录合成cDNA | 第34-35页 |
| ·PCR 扩增 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-47页 |
| ·pDriver-MP 质粒DNA 的提取 | 第36页 |
| ·MP 基因片段的克隆 | 第36-37页 |
| ·连接转化 | 第37-38页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第38-40页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·测序分析 | 第39-40页 |
| ·干扰载体的酶切鉴定 | 第40-42页 |
| ·正向插入GVAF | 第40-41页 |
| ·反向插入GVAR | 第41-42页 |
| ·干扰载体转入农杆菌后的PCR 验证 | 第42页 |
| ·总RNA 的纯度和完整性检测 | 第42-43页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达 | 第43-47页 |
| ·特异性检测 | 第43页 |
| ·瞬时干扰作用具有时间依赖性 | 第43-44页 |
| ·瞬时干扰作用的抗性效果 | 第44-45页 |
| ·瞬时表达在植物上的抗性表现 | 第45-47页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第47-49页 |
| ·结论 | 第47页 |
| ·MP 基因片段的获得 | 第47页 |
| ·构建了GVA 特异性的干扰载体 | 第47页 |
| ·表达载体向农杆菌中的转化 | 第47页 |
| ·瞬时表达分析 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·进一步研究方向 | 第48-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
