| 论文创新点 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 线粒体 | 第13页 |
| 1.2 线粒体的运动 | 第13-15页 |
| 1.3 线粒体DNA | 第15-17页 |
| 1.4 线粒体嵴形态 | 第17-18页 |
| 1.4.1 线粒体嵴形态 | 第17页 |
| 1.4.2 嵴形态维持相关蛋白 | 第17-18页 |
| 1.5 线粒体蛋白转运系统 | 第18-22页 |
| 1.5.1 线粒体外膜转位酶(TOM)复合物 | 第19页 |
| 1.5.2 TIM23转运途径 | 第19-20页 |
| 1.5.3 TIM22转运途径 | 第20页 |
| 1.5.4 MIA转运途径 | 第20-21页 |
| 1.5.5 线粒体外膜蛋白转运途径 | 第21-22页 |
| 1.6 线粒体接触位点系统(MICOS)及其功能 | 第22-23页 |
| 1.6.1 线粒体接触位点系统(MICOS)与嵴形态 | 第22页 |
| 1.6.2 线粒体接触位点系统(MICOS)与线粒体外膜相连 | 第22-23页 |
| 1.6.3 线粒体接触位点系统(MICOS)参与调节线粒体蛋白转运 | 第23页 |
| 1.7 线粒体与神经退行性疾病 | 第23-24页 |
| 1.8 TALENs简介 | 第24-26页 |
| 1.9 本研究的目的 | 第26-27页 |
| 2 实验材料和方法 | 第27-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-32页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 引物 | 第27-28页 |
| 2.1.4 抗体 | 第28页 |
| 2.1.5 试剂盒 | 第28页 |
| 2.1.6 DNA Marker以及蛋白Marker | 第28-29页 |
| 2.1.7 凝胶电泳、蛋白电泳、免疫印迹、免疫荧光以及免疫共沉淀相关溶液 | 第29-30页 |
| 2.1.8 酶 | 第30页 |
| 2.1.9 培养基和溶液 | 第30-31页 |
| 2.1.10 化学产品 | 第31页 |
| 2.1.11 主要的仪器和设备 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-45页 |
| 2.2.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第32页 |
| 2.2.2 胶回收实验 | 第32-33页 |
| 2.2.3 酶切和酶连 | 第33页 |
| 2.2.4 质粒和酶连产物的转化 | 第33页 |
| 2.2.5 菌种的保存 | 第33页 |
| 2.2.6 TA克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.7 细胞总DNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.8 凝胶电泳和蛋白电泳 | 第34-35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态的制备 | 第35页 |
| 2.2.10 细胞的培养 | 第35页 |
| 2.2.11 细胞的冻存 | 第35页 |
| 2.2.12 细胞的复苏 | 第35-36页 |
| 2.2.13 TALENs的设计以及质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.13.1 构建TALENs质粒的原理 | 第36页 |
| 2.2.13.2 针对Mitofilin和CHCHD6基因的TALENs的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.14 细胞的转染 | 第37页 |
| 2.2.15 透射电镜观察线粒体嵴形态 | 第37-38页 |
| 2.2.16 HeLa细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| 2.2.17 RNA反转录 | 第38-39页 |
| 2.2.18 免疫荧光实验 | 第39页 |
| 2.2.19 免疫共沉淀 | 第39-41页 |
| 2.2.20 蛋白质体外相互作用 | 第41-43页 |
| 2.2.20.1 原核表达载体的构建 | 第41页 |
| 2.2.20.2 融合蛋白的表达与检测 | 第41-42页 |
| 2.2.20.3 融合蛋白的大量表达与纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.20.4 融合蛋白的体外相互作用 | 第43页 |
| 2.2.21 线粒体膜电位的检测 | 第43-44页 |
| 2.2.22 细胞内ATP含量的检测 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-68页 |
| 3.1 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除细胞株的获得 | 第45-49页 |
| 3.1.1 针对Mitofilin和CHCHD6的TALENs设计及其效果鉴定 | 第45-47页 |
| 3.1.2 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除细胞株的验证 | 第47-49页 |
| 3.2 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除对线粒体嵴的影响 | 第49-53页 |
| 3.2.1 线粒体嵴形态的观察 | 第49-51页 |
| 3.2.2 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除对与线粒体嵴形态维持相关蛋白的影响 | 第51-53页 |
| 3.3 Mitofilin,CHCHD3,CHCHD6和Sam50属于同一复合物 | 第53-54页 |
| 3.4 Mitofilin和CHCHD6与短型OPA1相互作用 | 第54-55页 |
| 3.5 CHCHD6与Sam50直接相互作用 | 第55-57页 |
| 3.6 Mitofilin与Sam50直接相互作用 | 第57-59页 |
| 3.7 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除对线粒体形态的影响 | 第59-62页 |
| 3.7.1 线粒体形态的观察 | 第59-61页 |
| 3.7.2 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除对促线粒体分裂和融合调节蛋白的影响 | 第61-62页 |
| 3.8 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除导致线粒体功能异常 | 第62-63页 |
| 3.8.1 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除对粒体膜电位的影响 | 第63页 |
| 3.8.2 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除对细胞内ATP水平的影响 | 第63页 |
| 3.9 Mitofilin与线粒体蛋白转运复合物之间的关系 | 第63-64页 |
| 3.10 Mitofilin与Lamin A/C以及Vimentin之间的联系 | 第64-68页 |
| 4 讨论 | 第68-73页 |
| 4.1 Mitofilin稳定敲减和CHCHD6敲除损坏了线粒体嵴形态 | 第68页 |
| 4.2 Mitofilin、CHCHD3、CHCHD6和Sam50属于同一复合物 | 第68-69页 |
| 4.3 Mitofilin与CHCHD6调控嵴形态的机制分析 | 第69-71页 |
| 4.3.1 Mitofilin与嵴形态的维持 | 第69页 |
| 4.3.2 CHCHD6与嵴形态的维持 | 第69-71页 |
| 4.4 Mitofilin稳定敲减与CHCHD6敲除对线粒体形态的影响 | 第71页 |
| 4.5 Mitofilin稳定敲减与CHCHD6敲除对线粒体功能的影响 | 第71-72页 |
| 4.6 Mitofilin与线粒体蛋白转运复合物之间的关系 | 第72页 |
| 4.7 Mitofilin与Lamin A/C以及Vimentin之间的联系 | 第72-73页 |
| 5 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 攻博期间发表的与学位论文相关的科研成果目录 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
