| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1. 弓形虫的生物学特性 | 第16-21页 |
| 1.1 病原体 | 第16-18页 |
| 1.2 生活史 | 第18-19页 |
| 1.3 弓形虫病发病机制 | 第19-21页 |
| 2. 基因敲除技术研究进展 | 第21-25页 |
| 2.1 同源重组基因敲除 | 第21-23页 |
| 2.2 随机突变基因敲除 | 第23-25页 |
| 2.3 其他基因敲除技术 | 第25页 |
| 3. 细胞自噬与弓形虫互作研究 | 第25-34页 |
| 3.1 自噬的分类及生物学功能 | 第26-28页 |
| 3.2 自噬的分子机制及信号通路 | 第28-30页 |
| 3.3 自噬的检测 | 第30-32页 |
| 3.4 弓形虫自噬研究进展 | 第32-34页 |
| 第二章 弓形虫imp1基因敲除载体及回补载体的构建 | 第34-48页 |
| 1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 1.1 材料 | 第35页 |
| 1.2 方法 | 第35-40页 |
| 2 结果 | 第40-46页 |
| 2.1 PCR扩增 | 第40-41页 |
| 2.2 亚克隆载体的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3 重组质粒pBSK-imp1 5'UTR-ble的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| 2.4 敲除质粒pBSK-imp1 5'UTR-ble-imp1 3'UTR的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.5 重组质粒pTCY-imp1 5'UTR-imp1 3'UTR的鉴定 | 第44-45页 |
| 2.6 重组质粒pTCY-imp1 5'UTR-Psag1-imp1 CDS-imp1 3'UTR的鉴定 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 弓形虫imp1基因缺失株及回补株的筛选、鉴定及生物学功能研究 | 第48-64页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 1.1 材料 | 第49-50页 |
| 1.2 方法 | 第50-53页 |
| 2 结果 | 第53-62页 |
| 2.1 敲除质粒pBSK-imp1 5'UTR-ble-imp1 3'UTR的线性化 | 第53-54页 |
| 2.2 PCR鉴定敲除虫株 | 第54-55页 |
| 2.3 △imp1 RH虫株回补虫株的筛选及鉴定 | 第55-56页 |
| 2.4 △imp1虫株的间接免疫荧光鉴定 | 第56页 |
| 2.5 免疫印迹检测IMP1蛋白表达 | 第56-57页 |
| 2.6 △imp1虫株粘附、入侵毒力降低 | 第57-58页 |
| 2.7 △imp1虫株胞内增殖水平降低 | 第58-59页 |
| 2.8 △imp1虫株毒力水平降低 | 第59-60页 |
| 2.9 △imp1虫株体内增殖水平降低 | 第60-62页 |
| 3. 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 弓形虫感染引起细胞自噬 | 第64-79页 |
| 1 材料与方法 | 第64-70页 |
| 1.1 材料 | 第64-65页 |
| 1.2 方法 | 第65-70页 |
| 2 结果 | 第70-76页 |
| 2.1 弓形虫感染Vero细胞后自噬相关蛋白的变化 | 第70-71页 |
| 2.2 透射电镜观察弓形虫感染Vero细胞后自噬泡的超微结构 | 第71-73页 |
| 2.3 免疫荧光观察弓形虫感染Vero细胞后引起LC3的聚集 | 第73-75页 |
| 2.4 自噬抑制剂及促进剂处理引起自噬相关蛋白的变化 | 第75-76页 |
| 2.5 自噬抑制剂及促进剂处理引起弓形虫胞内增殖的变化 | 第76页 |
| 3 讨论 | 第76-79页 |
| 第五章 弓形虫感染引起细胞自噬的信号通路 | 第79-94页 |
| 1 材料与方法 | 第80-84页 |
| 1.1 材料 | 第80-81页 |
| 1.2 方法 | 第81-84页 |
| 2 结果 | 第84-91页 |
| 2.1 弓形虫感染诱导细胞自噬的信号通路 | 第84-87页 |
| 2.2 抑制剂对Raf1-MEK-ERK通路的影响 | 第87页 |
| 2.3 抑制剂对弓形虫通过Raf1-MEK-ERK通路诱导细胞自噬的影响 | 第87-90页 |
| 2.4 抑制剂对弓形虫胞内增殖的影响 | 第90页 |
| 2.5 抑制剂对弓形虫增殖相关蛋白mRNA水平的影响 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-94页 |
| 第六章 弓形虫IMP1蛋白与细胞自噬 | 第94-105页 |
| 1 材料与方法 | 第94-99页 |
| 1.1 材料 | 第94-96页 |
| 1.2 方法 | 第96-99页 |
| 2 结果 | 第99-103页 |
| 2.1 真核表达载体的PCR鉴定 | 第99-100页 |
| 2.2 真核表达载体的酶切鉴定 | 第100页 |
| 2.3 质粒转染的免疫印迹检测 | 第100-101页 |
| 2.4 IMP1蛋白诱导自噬的信号通路 | 第101-102页 |
| 2.5 IMP1蛋白与Raf1-MEK-ERK信号通路的互作 | 第102-103页 |
| 3 讨论 | 第103-105页 |
| 全文结论 | 第105-106页 |
| 论文创新性 | 第106-107页 |
| 研究展望 | 第107-108页 |
| 附录1 常用溶液的配制 | 第108-110页 |
| 附录2 实验过程中涉及的引物序列 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 攻读博士学位期间的主要成果 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-120页 |
