| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| 第一章 猪圆环病毒以及类圆环病毒的研究进展 | 第10-20页 |
| 1 病原学研究进展 | 第10-15页 |
| ·病毒的发现 | 第10-11页 |
| ·病毒的生物学特性 | 第11-13页 |
| ·致病机理 | 第13-15页 |
| 2 实验室诊断技术的研究进展 | 第15-18页 |
| ·病毒的分离 | 第15页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)检测方法 | 第15-17页 |
| ·常规PCR | 第15-16页 |
| ·复合PCR | 第16页 |
| ·巢式PCR | 第16页 |
| ·定量PCR | 第16-17页 |
| ·竞争PCR | 第17页 |
| ·环介导等温扩增技术 | 第17页 |
| ·间接免疫荧光实验(IFA) | 第17页 |
| ·免疫组织化学技术(IHC) | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第17-18页 |
| ·原位核酸杂交实验(ISH) | 第18页 |
| 3 单克隆抗体研究进展 | 第18-20页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第二部分 实验部分 | 第24-50页 |
| 第一章 类圆环病毒P1因子ORF2蛋白原核表达鉴定和优化 | 第24-36页 |
| 1 材料和方法 | 第25-29页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·基因片段的获取 | 第26页 |
| ·基因表达载体的构建和鉴定 | 第26-28页 |
| ·基因的诱导表达及表达条件优化 | 第28-29页 |
| ·Western-blot鉴定 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-34页 |
| ·基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第30-31页 |
| ·表达条件的优化 | 第31-33页 |
| ·蛋白的诱导表达以及Western-blot鉴定 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-36页 |
| 第二章 抗类圆环病毒P1因子单克隆抗体的制备及鉴定 | 第36-50页 |
| 1 材料与方法 | 第37-44页 |
| ·试验动物、质粒、菌种及细胞 | 第37页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第37页 |
| ·免疫抗原制备 | 第37-39页 |
| ·目的片段的扩增 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的构建、鉴定和保存 | 第38-39页 |
| ·筛选以及鉴定用的抗原的制备 | 第39-40页 |
| ·动物免疫 | 第40页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第40页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的培养 | 第40-41页 |
| ·脾细胞的制备 | 第41页 |
| ·细胞融合 | 第41页 |
| ·阳性细胞株的筛选和亚克隆 | 第41-42页 |
| ·最佳抗原包被浓度和抗体稀释比例的确定 | 第41-42页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第42页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养、冻存和复苏 | 第42-43页 |
| ·腹水型单克隆抗体的制备 | 第43页 |
| ·腹水型单克隆抗体效价的检测 | 第43页 |
| ·单克隆抗体特异性和结合性的鉴定 | 第43页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第43页 |
| ·间接荧光免疫 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-47页 |
| ·P1因子ORF2a以及ORF2b重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·P1ORF2蛋白以及PCV2ORF2蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·细胞的融合率、阳性率和细胞的稳定性 | 第46页 |
| ·腹水型单克隆抗体的效价测定 | 第46页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第47页 |
| ·间接荧光免疫 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-50页 |
| 全文总结 | 第50-52页 |
| 附录 常用试剂的配制 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |