| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语/符号说明 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-20页 |
| 研究现状、成果 | 第13-18页 |
| 研究目的、方法 | 第18-20页 |
| 一、基于荧光素酶基因的非靶向性光学分子成像 | 第20-45页 |
| 1.1 对象和方法 | 第21-34页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 1.1.2 获赠质粒pCMV-Luc的扩增及测序验证 | 第25-26页 |
| 1.1.3 实验细胞培养 | 第26-27页 |
| 1.1.4 不同递送系统介导的质粒pCMV-Luc细胞转染实验 | 第27-31页 |
| 1.1.5 基于Luc基因的体外生物自发光成像 | 第31页 |
| 1.1.6 利用体外转染Luc基因后的PC-3 细胞构建皮下种植瘤模型 | 第31-32页 |
| 1.1.7 前列腺癌种植瘤小鼠模型的建立 | 第32-33页 |
| 1.1.8 构建皮下种植瘤裸鼠模型后瘤内注射腺病毒Ad.pCMV-Luc | 第33-34页 |
| 1.1.9 基于Luc基因的活体生物自发光成像 | 第34页 |
| 1.2 结果 | 第34-39页 |
| 1.2.1 质粒pCMV-Luc的验证结果 | 第34-35页 |
| 1.2.2 腺病毒载体Ad.pCMV-Luc的构建及滴度检测 | 第35页 |
| 1.2.3 Lip2000转染法介导的细胞生物发光成像结果 | 第35页 |
| 1.2.4 PEI转染法介导的细胞生物发光成像结果 | 第35-36页 |
| 1.2.5 腺病毒转染法介导的细胞生物发光成像结果 | 第36-37页 |
| 1.2.6 肿瘤细胞体外转染后皮下种植的生物发光成像结果 | 第37-38页 |
| 1.2.7 腺病毒Ad.pCMV-Luc直接肿瘤内注射后的生物发光成像结果 | 第38-39页 |
| 1.3 讨论 | 第39-43页 |
| 1.3.1 Luc基因光学成像在分子影像中的应用 | 第39-40页 |
| 1.3.2 不同转染方式对Luc基因介导的生物自发光成像效果的影响 | 第40-42页 |
| 1.3.3 基于pCMV-Luc转染的活体Luc基因光学成像结果分析 | 第42-43页 |
| 1.3.4 Luc光学基因成像在分子影像中的初步应用与价值分析 | 第43页 |
| 1.4 小结 | 第43-45页 |
| 二、体外基因重组在肿瘤靶向光学分子成像中的应用 | 第45-64页 |
| 2.1 对象和方法 | 第46-54页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第46-50页 |
| 2.1.2 细胞培养 | 第50页 |
| 2.1.3 重组基因探针pDD3-TfR-Luc的功能验证实验 | 第50-53页 |
| 2.1.4 基因探针pDD3-TfR-Luc介导的细胞光学分子成像 | 第53页 |
| 2.1.5 前列腺癌种植瘤小鼠模型的建立 | 第53页 |
| 2.1.6 基因探针pDD3-TfR-Luc介导的活体光学分子成像 | 第53-54页 |
| 2.2 结果 | 第54-59页 |
| 2.2.1 基因探针pDD3-TfR-Luc在前列腺癌细胞内的表达结果 | 第54-56页 |
| 2.2.2 基因探针pDD3-TfR-Luc介导的细胞光学成像结果 | 第56-58页 |
| 2.2.3 前列腺癌种植瘤动物模型的构建结果 | 第58页 |
| 2.2.4 基因探针pDD3-TfR-Luc介导的活体靶向光学成像结果 | 第58-59页 |
| 2.3 讨论 | 第59-63页 |
| 2.3.1 组织特异性启动子介导的靶向光学基因成像设计思路 | 第59-60页 |
| 2.3.2 组织特异性启动子介导的肿瘤靶向光学基因成像效果分析 | 第60-61页 |
| 2.3.3 基于体外基因重组的靶向与非靶向性Luc基因光学分子成像对比分析 | 第61-62页 |
| 2.3.4 基于体外基因重组调控 Luc 基因的肿瘤靶向光学成像意义与局限 | 第62-63页 |
| 2.4 小结 | 第63-64页 |
| 三、CRISPR/Cas9在体基因编辑技术介导的光学分子成像 | 第64-100页 |
| 3.1 对象和方法 | 第66-83页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第66-68页 |
| 3.1.2 构建CRISPR/Cas9系统质粒pU6-gRNA(SS)-pCD133(P2)-Cas9 | 第68-76页 |
| 3.1.3 构建含失活Luc基因的质粒pCMV-LucL-SS-LucR | 第76-77页 |
| 3.1.4 构建组织特异性启动子驱动的重组质粒pSur-LucL-SS-LucR | 第77-81页 |
| 3.1.5 用于成像实验的质粒扩增与浓度测定 | 第81页 |
| 3.1.6 CRISPR/Cas9基因编辑系统介导的体外光学分子成像 | 第81-83页 |
| 3.2 结果 | 第83-93页 |
| 3.2.1 gRNA序列的PCR鉴定结果 | 第83-84页 |
| 3.2.2 重组质粒pU6-gRNA(SS)-pβactin-Cas9的测序验证结果 | 第84-85页 |
| 3.2.3 质粒pCMV-LucL-SS-LucR的测序验证结果 | 第85-88页 |
| 3.2.4 重组质粒pSur-LucL-SS-LucR的扩增及测序鉴定结果 | 第88-89页 |
| 3.2.5 质粒pU6-gRNA(N)-pβactin-Cas9、pU6-gRNA(SS)-pβactin-Cas9、pCMV-LucL-SS-LucR与pSur-LucL-SS-LucR的扩增结果 | 第89页 |
| 3.2.6 CRISPR/Cas9系统介导的前列腺癌细胞生物自发光成像结果 | 第89-93页 |
| 3.3 讨论 | 第93-99页 |
| 3.3.1 基因重组技术在生命科学研究领域的应用与进展 | 第93-94页 |
| 3.3.2 CRISPR/Cas9在体基因重组技术介导的基因分子成像原理与设计思路 | 第94-95页 |
| 3.3.3 光学基因成像的主要分类、成像原理与发展现状 | 第95-97页 |
| 3.3.4 基于碱基互补配对原则的光学基因靶向成像 | 第97页 |
| 3.3.5 CRISPR/Cas9在体基因编辑系统介导的光学基因成像结果分析 | 第97-98页 |
| 3.3.6 CRISPR/Cas9基因编辑系统——实现在体精准双“开关”、多靶点肿瘤靶向成像策略的希望 | 第98-99页 |
| 3.4 小结 | 第99-100页 |
| 全文结论 | 第100-102页 |
| 论文创新点 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第113-114页 |
| 综述 CRISPR/Cas系统在生物医学领域中的研究进展 | 第114-141页 |
| 综述参考文献 | 第132-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 个人简历 | 第143页 |
