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内蒙土壤虫生真菌的分离鉴定及RNAi工程菌株构建

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
缩略词及中英文对照第7-11页
1 前言第11-17页
    1.1 虫生真菌的研究概况第11-12页
        1.1.2 虫生真菌分离第11-12页
    1.2 虫生真菌的鉴定方法第12-13页
    1.3 虫生真菌的基因工程菌种改良第13-16页
        1.3.1 遗传转化的方法简述第13-14页
        1.3.2 遗传转化的选择性标记第14-15页
        1.3.3 RNAi防治害虫的手段第15-16页
    1.4 研究思路第16-17页
2 材料与方法第17-28页
    2.1 土壤虫生真菌的分离第17-18页
        2.1.1 供试材料第17页
        2.1.2 主要仪器与试剂第17-18页
        2.1.3 实验方法第18页
    2.2 菌种鉴定第18-20页
        2.2.1 实验材料与仪器第18页
        2.2.2 形态鉴定第18页
        2.2.3 分子生物学鉴定第18-20页
    2.3 虫生真菌生物活性测定第20-21页
        2.3.1 实验材料与仪器第20页
        2.3.2 试验方法第20-21页
    2.4 球孢白僵菌RNAi工程菌株构建第21-28页
        2.4.1 供试材料第21-22页
        2.4.2 主要试剂第22页
        2.4.3 主要仪器第22页
        2.4.4 实验方法第22-26页
            2.4.4.0 幼嫩菌丝的培养第22-23页
            2.4.4.1 原生质体制备第23页
            2.4.4.2 不同酶配比对原生质体的影响第23-24页
            2.4.4.3 不同酶解时间对原生质体的影响第24页
            2.4.4.4 原生质体的纯化第24页
            2.4.4.5 质粒P-F-R小量提取第24-25页
            2.4.4.6 SlDorsal基因片段的检测第25页
            2.4.4.7 原生质体转化及转化子筛选第25-26页
        2.4.5 重组菌株的初步筛选第26页
        2.4.6 重组菌株的稳定遗传筛选第26-27页
        2.4.7 工程菌株对斜纹夜蛾的活性测定第27-28页
            2.4.7.1 试验材料第27页
            2.4.7.2 试验方法第27-28页
3 结果与分析第28-47页
    3.1 内蒙古地区虫生真菌的分离第28-29页
        3.1.1 各地区土壤样品的分离第28-29页
    3.2 内蒙古地区菌种鉴定第29-39页
        3.2.3 形态学鉴定第29-32页
        3.2.4 分子生物学鉴定第32-34页
        3.2.5 基因序列的测定、比对以及发育树的构建第34-39页
    3.3 内蒙古地区部分土壤虫生真菌生物活性的测定第39-41页
        3.3.1 菌株侵染烟粉虱若虫形态第39-40页
        3.3.3 菌株对B型烟粉虱的致病力第40-41页
        3.3.4 各菌株对烟粉虱若虫的LT50第41页
    3.4 球孢白僵菌工程菌株的构建第41-45页
        3.4.1 球孢白僵菌幼嫩菌丝以及原生质体的制备第41-42页
        3.4.2 不同酶配比对原生质体的影响第42-43页
        3.4.3 不同酶解时间对原生质体的影响第43页
        3.4.4 P-Z-F质粒SlDorsal基因的验证第43-44页
        3.4.5 重组真菌的筛选第44-45页
    3.5 工程菌株对斜纹夜蛾的活性测定第45-47页
        3.5.1 高浓度孢子悬浮液(108 spores/mL)对斜纹夜蛾的毒力测定第45页
        3.5.2 重组菌株不同浓度下对斜纹夜蛾的毒力第45-46页
        3.5.3 重组菌株对斜纹夜蛾的毒力测定第46-47页
4 结论与讨论第47-51页
    4.1 结论第47-48页
    4.2 讨论第48-51页
致谢第51-52页
参考文献第52-57页
附录A:26个菌株菌落正面与背面图第57-60页
附录B:真菌鉴定的相关基因序列第60-66页
附录C:硕士在读期间论文发表、项目研究以及参加会议、获奖情况第66页

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