摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
缩略词及中英文对照 | 第7-11页 |
1 前言 | 第11-17页 |
1.1 虫生真菌的研究概况 | 第11-12页 |
1.1.2 虫生真菌分离 | 第11-12页 |
1.2 虫生真菌的鉴定方法 | 第12-13页 |
1.3 虫生真菌的基因工程菌种改良 | 第13-16页 |
1.3.1 遗传转化的方法简述 | 第13-14页 |
1.3.2 遗传转化的选择性标记 | 第14-15页 |
1.3.3 RNAi防治害虫的手段 | 第15-16页 |
1.4 研究思路 | 第16-17页 |
2 材料与方法 | 第17-28页 |
2.1 土壤虫生真菌的分离 | 第17-18页 |
2.1.1 供试材料 | 第17页 |
2.1.2 主要仪器与试剂 | 第17-18页 |
2.1.3 实验方法 | 第18页 |
2.2 菌种鉴定 | 第18-20页 |
2.2.1 实验材料与仪器 | 第18页 |
2.2.2 形态鉴定 | 第18页 |
2.2.3 分子生物学鉴定 | 第18-20页 |
2.3 虫生真菌生物活性测定 | 第20-21页 |
2.3.1 实验材料与仪器 | 第20页 |
2.3.2 试验方法 | 第20-21页 |
2.4 球孢白僵菌RNAi工程菌株构建 | 第21-28页 |
2.4.1 供试材料 | 第21-22页 |
2.4.2 主要试剂 | 第22页 |
2.4.3 主要仪器 | 第22页 |
2.4.4 实验方法 | 第22-26页 |
2.4.4.0 幼嫩菌丝的培养 | 第22-23页 |
2.4.4.1 原生质体制备 | 第23页 |
2.4.4.2 不同酶配比对原生质体的影响 | 第23-24页 |
2.4.4.3 不同酶解时间对原生质体的影响 | 第24页 |
2.4.4.4 原生质体的纯化 | 第24页 |
2.4.4.5 质粒P-F-R小量提取 | 第24-25页 |
2.4.4.6 SlDorsal基因片段的检测 | 第25页 |
2.4.4.7 原生质体转化及转化子筛选 | 第25-26页 |
2.4.5 重组菌株的初步筛选 | 第26页 |
2.4.6 重组菌株的稳定遗传筛选 | 第26-27页 |
2.4.7 工程菌株对斜纹夜蛾的活性测定 | 第27-28页 |
2.4.7.1 试验材料 | 第27页 |
2.4.7.2 试验方法 | 第27-28页 |
3 结果与分析 | 第28-47页 |
3.1 内蒙古地区虫生真菌的分离 | 第28-29页 |
3.1.1 各地区土壤样品的分离 | 第28-29页 |
3.2 内蒙古地区菌种鉴定 | 第29-39页 |
3.2.3 形态学鉴定 | 第29-32页 |
3.2.4 分子生物学鉴定 | 第32-34页 |
3.2.5 基因序列的测定、比对以及发育树的构建 | 第34-39页 |
3.3 内蒙古地区部分土壤虫生真菌生物活性的测定 | 第39-41页 |
3.3.1 菌株侵染烟粉虱若虫形态 | 第39-40页 |
3.3.3 菌株对B型烟粉虱的致病力 | 第40-41页 |
3.3.4 各菌株对烟粉虱若虫的LT50 | 第41页 |
3.4 球孢白僵菌工程菌株的构建 | 第41-45页 |
3.4.1 球孢白僵菌幼嫩菌丝以及原生质体的制备 | 第41-42页 |
3.4.2 不同酶配比对原生质体的影响 | 第42-43页 |
3.4.3 不同酶解时间对原生质体的影响 | 第43页 |
3.4.4 P-Z-F质粒SlDorsal基因的验证 | 第43-44页 |
3.4.5 重组真菌的筛选 | 第44-45页 |
3.5 工程菌株对斜纹夜蛾的活性测定 | 第45-47页 |
3.5.1 高浓度孢子悬浮液(108 spores/mL)对斜纹夜蛾的毒力测定 | 第45页 |
3.5.2 重组菌株不同浓度下对斜纹夜蛾的毒力 | 第45-46页 |
3.5.3 重组菌株对斜纹夜蛾的毒力测定 | 第46-47页 |
4 结论与讨论 | 第47-51页 |
4.1 结论 | 第47-48页 |
4.2 讨论 | 第48-51页 |
致谢 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-57页 |
附录A:26个菌株菌落正面与背面图 | 第57-60页 |
附录B:真菌鉴定的相关基因序列 | 第60-66页 |
附录C:硕士在读期间论文发表、项目研究以及参加会议、获奖情况 | 第66页 |