| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 引言 | 第12-20页 |
| 1 白斑综合症病毒（WSSV）防治及囊膜蛋白VP28研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1 白斑综合症病毒 | 第12页 |
| 1.2 WSSV防治的研究 | 第12-13页 |
| 1.3 WSSV囊膜蛋白VP28 | 第13-14页 |
| 2 蓝藻基因工程和鱼腥藻7120的研究 | 第14-15页 |
| 2.1 蓝藻基因工程 | 第14-15页 |
| 2.2 鱼腥藻 7120 | 第15页 |
| 3 外源基因表达量定量方法的和单克隆抗体研究 | 第15-19页 |
| 3.1 RT-qPCR | 第16页 |
| 3.2 ELISA | 第16-17页 |
| 3.3 Western Blotting | 第17-18页 |
| 3.4 单克隆抗体 | 第18-19页 |
| 4 本研究的目的、内容及意义 | 第19-20页 |
| 第一章 VP28基因原核表达载体构建与表达及纯化 | 第20-37页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第20-21页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-26页 |
| 2.1 目的基因的合成 | 第21页 |
| 2.2 目的序列的扩增 | 第21-22页 |
| 2.3 目的片段与表达载体的连接 | 第22页 |
| 2.4 连接产物的转化 | 第22-23页 |
| 2.5 阳性克隆鉴定 | 第23页 |
| 2.6 重组质粒的双酶切和质粒电泳 | 第23-24页 |
| 2.7 DNA测序 | 第24页 |
| 2.8 重组质粒pET-28a-vp28转化至大肠杆菌BL21(DE3) | 第24页 |
| 2.9 IPTG诱导融合蛋白的表达 | 第24页 |
| 2.10 表达产物分布的确定 | 第24-25页 |
| 2.11 融合蛋白的纯化 | 第25页 |
| 2.12 纯化后蛋白的浓度测定 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-36页 |
| 3.1 目的序列的扩增 | 第26页 |
| 3.2 目的片段与表达载体的连接 | 第26-27页 |
| 3.3 连接产物的转化 | 第27-28页 |
| 3.4 阳性克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.5 重组质粒双酶切和质粒电泳 | 第29页 |
| 3.6 测序结果 | 第29-31页 |
| 3.7 重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第31-32页 |
| 3.8 SDS-PAGE检测诱导表达的融合蛋白 | 第32页 |
| 3.9 表达产物的分布 | 第32-33页 |
| 3.10 融合蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 3.11 SDS-PAGE检测纯化后的融合蛋白 | 第34-35页 |
| 3.12 纯化后蛋白浓度的测定 | 第35-36页 |
| 讨论 | 第36-37页 |
| 第二章 抗VP28单克隆抗体的制备 | 第37-44页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-39页 |
| 2.1 抗原的设计与制备 | 第38页 |
| 2.2 免疫小鼠 | 第38页 |
| 2.3 细胞融合与阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第38-39页 |
| 2.4 腹水的制备 | 第39页 |
| 2.5 ELISA法测定效价、表位信息和抗体分型 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| 3.1 抗原表位的设计与选取 | 第39-41页 |
| 3.2 免疫鼠抗体的生产与ELISA检测 | 第41页 |
| 3.3 杂交瘤细胞的筛选与腹水制备 | 第41-42页 |
| 3.4 ELISA法测定单抗分型、效价和表位信息 | 第42页 |
| 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 外源蛋白表达量的定量检测 | 第44-59页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1 藻种 | 第44页 |
| 1.2 仪器 | 第44-45页 |
| 1.3 试剂 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| 2.1 野生型和转基因鱼腥藻7120的固体分离与纯化 | 第45页 |
| 2.2 转基因鱼腥藻7120的液体培养 | 第45页 |
| 2.3 抗生素筛选转基因鱼腥藻 7120 | 第45-46页 |
| 2.4 野生型和转基因鱼腥藻7120的生长曲线 | 第46页 |
| 2.5 转基因鱼腥藻7120总蛋白样品的制备 | 第46页 |
| 2.6 总蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
| 2.7 不同生长时期转基因鱼腥藻7120中VP28表达量的测定 | 第47-49页 |
| 3 结果 | 第49-57页 |
| 3.1 野生型和转基因鱼腥藻7120的固体分离与纯化 | 第49-50页 |
| 3.2 转基因鱼腥藻7120的液体培养和抗生素下的筛选 | 第50-52页 |
| 3.3 总蛋白样品的制备 | 第52页 |
| 3.4 转基因鱼腥藻7120的总蛋白浓度 | 第52-53页 |
| 3.5 野生型和转基因鱼腥藻7120的生长曲线 | 第53-55页 |
| 3.6 不同生长时期的转基因鱼腥藻7120中VP28表达量 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 攻读硕士期间的主要科研成绩 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
