| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要缩略词 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 1 研究目的和意义 | 第13页 |
| 2 论文理论依据 | 第13-14页 |
| 3 论文总体研究思路 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1.1 绵羊支原体肺炎的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.0 病原学研究 | 第15页 |
| 1.1.1 绵羊肺炎支原体的分类 | 第15页 |
| 1.1.2 绵羊支原体的培养特性和生化特征 | 第15-16页 |
| 1.1.3 流行病学研究 | 第16页 |
| 1.1.4 致病机制的研究 | 第16-17页 |
| 1.2 MBL研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1 绵羊MBL的基本结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 绵羊MBL的功能概况 | 第18-19页 |
| 1.2.3 MBL与感染性疾病的相关性 | 第19页 |
| 1.2.4 MBL免疫治疗现状 | 第19-20页 |
| 1.2.5 MBL基因与绵羊支原体肺炎的相关性 | 第20页 |
| 1.3 相关细胞因子的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.1 IL-2 的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.2 IL-4 的研究进展 | 第21页 |
| 1.3.3 IFN的研究进展 | 第21页 |
| 1.3.4 TNF的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.5 C1和C3的研究进展 | 第22页 |
| 1.4 ELISA的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5 荧光定量PCR的研究进展 | 第23页 |
| 1.6 miRNA的研究进展 | 第23-25页 |
| 第二章 绵羊MBL基因真核表达载体的构建及MBL蛋白对患病绵羊的免疫治疗 | 第25-40页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第25页 |
| 1.2 试验动物 | 第25页 |
| 1.3 引物设计与PCR扩增 | 第25-26页 |
| 1.4 pUC57-MBL载体构建 | 第26页 |
| 1.5 pTT5-MBL真核表达载体的构建 | 第26页 |
| 1.6 细胞培养 | 第26页 |
| 1.7 细胞转染 | 第26页 |
| 1.8 RT-PCR分析外源基因的表达 | 第26页 |
| 1.9 重组蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 1.10 SDS-PAGE和Western-blot检测 | 第27页 |
| 1.11 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第27页 |
| 1.12 配体结合试验 | 第27页 |
| 1.13 人工感染试验 | 第27页 |
| 1.14 支原体分离鉴定 | 第27-28页 |
| 1.15 绵羊肺炎支原体的PCR检测 | 第28页 |
| 1.16 血浆来源MBL蛋白的提取及活性检测 | 第28-29页 |
| 1.17 治疗试验 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-38页 |
| 2.1 真核表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2 CHO-MBL和 293-MBL细胞的筛选与克隆化培养 | 第31页 |
| 2.3 CHO-MBL细胞 293-MBL细胞内目的基因mRNA的表达 | 第31页 |
| 2.4 重组MBL蛋白的SDS-PAGE和Western-blot检测 | 第31-33页 |
| 2.5 血浆来源MBL蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳分析结果 | 第33-34页 |
| 2.6 ELISA结果 | 第34页 |
| 2.7 绵羊支原体理化鉴定 | 第34页 |
| 2.8 绵羊肺炎支原体的PCR检测 | 第34-35页 |
| 2.9 临床表现和剖检变化 | 第35-36页 |
| 2.10 病理变化 | 第36-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 4 结论 | 第39-40页 |
| 第三章 ELISA方法和荧光定量PCR检测MBL蛋白对绵羊肺炎支原体免疫调节作用 | 第40-68页 |
| 1 材料与方法 | 第40-45页 |
| 1.1 试验动物 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
| 1.3 试验方法 | 第41-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-64页 |
| 2.1 MBL和各细胞因子标准曲线图 | 第45-47页 |
| 2.2 MBL血清水平ELISA检测结果 | 第47-49页 |
| 2.3 血清中IFN-γ、TNF-α、补体C1、C3、IL-2、IL-4 ELISA检测结果 | 第49-55页 |
| 2.4 样品总RNA质量检测 | 第55页 |
| 2.5 各引物PCR扩增结果 | 第55-57页 |
| 2.6 荧光定量PCR结果 | 第57-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 第四章 高通量测序技术分析患病绵羊的差异microRNAs | 第68-84页 |
| 1 材料与方法 | 第68-71页 |
| 1.1 试验动物 | 第68页 |
| 1.2 样品采集 | 第68页 |
| 1.3 总RNA提取及鉴定 | 第68页 |
| 1.4 序列的初步分析 | 第68-69页 |
| 1.5 生物信息学分析 | 第69页 |
| 1.6 新miRNA预测 | 第69页 |
| 1.7 已知miRNA差异分析 | 第69页 |
| 1.8 荧光定量qRT-PCR验证 | 第69-71页 |
| 1.9 靶基因预测 | 第71页 |
| 1.10 靶基因的GO富集和KEGG通路分析 | 第71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-82页 |
| 2.1 总RNA提取结果 | 第71-72页 |
| 2.2 Solexa测序结果 | 第72-73页 |
| 2.3 新miRNA预测 | 第73-74页 |
| 2.4 差异表达miRNA分析 | 第74-76页 |
| 2.5 荧光定量验证 | 第76-77页 |
| 2.6 靶基因预测 | 第77-78页 |
| 2.7 靶基因GO富集分析与KEGG分析 | 第78-81页 |
| 2.8 miR-432组织表达谱分析 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 全文总结 | 第84页 |
| 创新点 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 附录：实验试剂配制 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 作者 简介 | 第94-95页 |
| 导师评阅表 | 第95页 |
