| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 烷基苯酚结构及其生物毒性 | 第10-12页 |
| 1.1.1 烷基苯酚简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 烷基苯酚的雌激素活性机理 | 第11页 |
| 1.1.3 烷基苯酚的污染现状 | 第11-12页 |
| 1.2 烷基苯酚类化合物检测方法 | 第12-14页 |
| 1.2.1 仪器检测方法 | 第13页 |
| 1.2.2 免疫学检测方法 | 第13-14页 |
| 1.2.3 其他方法 | 第14页 |
| 1.3 抗体结构和功能研究 | 第14-15页 |
| 1.3.1 抗体基本结构 | 第14-15页 |
| 1.3.2 抗体对抗原识别机制 | 第15页 |
| 1.4 同源建模及分子对接 | 第15-16页 |
| 1.4.1 蛋白质结晶研究现状 | 第15页 |
| 1.4.2 同源建模原理 | 第15-16页 |
| 1.4.3 分子对接原理 | 第16页 |
| 1.5 单链抗体意义 | 第16-17页 |
| 1.6 课题研究意义与研究内容 | 第17-18页 |
| 第2章 烷基苯酚单克隆抗体的制备 | 第18-42页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.2.1 化学药品 | 第18-19页 |
| 2.2.2 生物药品与制剂 | 第19页 |
| 2.2.3 试剂盒(Kit) | 第19-20页 |
| 2.2.4 培养基 | 第20页 |
| 2.2.5 缓冲液 | 第20-21页 |
| 2.2.6 常用仪器与耗材 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.3.1 APA-蛋白的偶联及鉴定 | 第22页 |
| 2.3.2 采集阴性血清 | 第22-23页 |
| 2.3.3 APA-BSA完全抗原免疫小鼠 | 第23页 |
| 2.3.4 血清抗体效价测定 | 第23-24页 |
| 2.3.5 细胞融合 | 第24-25页 |
| 2.3.6 融合细胞的培养 | 第25页 |
| 2.3.7 杂交瘤细胞株间接ELISA初筛 | 第25页 |
| 2.3.8 杂交瘤细胞株的单克隆 | 第25-26页 |
| 2.3.9 单克隆细胞株间接ELISA筛选 | 第26页 |
| 2.3.10 杂交瘤细胞株的间接竞争ELISA筛选 | 第26-27页 |
| 2.3.11 单克隆细胞培养液间接竞争ELISA | 第27-28页 |
| 2.3.12 杂交瘤细胞株的冻存 | 第28页 |
| 2.3.13 小鼠腹水制备 | 第28页 |
| 2.3.14 单克隆抗体的纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.15 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29页 |
| 2.3.16 抗体浓度检测 | 第29-30页 |
| 2.3.17 单克隆抗体间接竞争ELISA | 第30-31页 |
| 2.3.18 抗体的亚型鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.19 抗体特异性检测 | 第32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-42页 |
| 2.4.1 完全抗原的偶联 | 第32-33页 |
| 2.4.2 小鼠血清效价 | 第33-34页 |
| 2.4.3 筛选数据 | 第34-36页 |
| 2.4.4 细胞培养上清间接竞争ELISA | 第36页 |
| 2.4.5 腹水抗体分型 | 第36-37页 |
| 2.4.6 腹水中单克隆抗体纯化 | 第37-38页 |
| 2.4.7 单克隆抗体间接竞争ELISA | 第38-39页 |
| 2.4.8 单克隆抗体特异性检测 | 第39-41页 |
| 2.4.9 小结 | 第41-42页 |
| 第3章 抗体可变区序列克隆及同源建模 | 第42-57页 |
| 3.1 前言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-45页 |
| 3.2.1 化学药品 | 第42-43页 |
| 3.2.2 生物制剂 | 第43页 |
| 3.2.3 培养基 | 第43-44页 |
| 3.2.4 试剂盒 | 第44页 |
| 3.2.5 缓冲液 | 第44页 |
| 3.2.6 实验器材 | 第44-45页 |
| 3.2.7 实验所需引物 | 第45页 |
| 3.2.8 实验所需软件和数据库 | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-49页 |
| 3.3.1 细胞复苏及扩大培养 | 第45-46页 |
| 3.3.2 细胞总mRNA抽提 | 第46页 |
| 3.3.3 mRNA逆转录 | 第46页 |
| 3.3.4 聚合酶链式反应(PCR) | 第46-47页 |
| 3.3.5 DNA琼脂糖凝胶回收 | 第47页 |
| 3.3.6 目的片段与T载体连接 | 第47-48页 |
| 3.3.7 制备JM83感受态细胞 | 第48页 |
| 3.3.8 大肠杆菌的转化 | 第48页 |
| 3.3.9 测序结果生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 3.3.10 可变区同源建模 | 第49页 |
| 3.3.11 戊基苯酚与抗体可变区分子对接实验 | 第49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-55页 |
| 3.4.1 逆转录PCR结果 | 第49-50页 |
| 3.4.2 胶回收电泳结果 | 第50页 |
| 3.4.3 菌落PCR结果 | 第50-51页 |
| 3.4.4 可变区序列分析 | 第51-54页 |
| 3.4.5 可变区同源建模 | 第54-55页 |
| 3.4.6 分子对接与亲和力分析 | 第55页 |
| 3.5 小结 | 第55-57页 |
| 第4章 结论、创新点及展望 | 第57-61页 |
| 4.1 主要结论 | 第57页 |
| 4.2 讨论 | 第57-60页 |
| 4.2.1 完全抗原制备 | 第57-58页 |
| 4.2.2 烷基苯酚单克隆抗体制备与分析 | 第58-59页 |
| 4.2.3 抗体结构分析 | 第59页 |
| 4.2.4 抗体结合位点研究 | 第59-60页 |
| 4.3 课题展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 研究成果 | 第68页 |