| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 引言 | 第15-28页 |
| 1 枯草芽胞杆菌的抑菌作用 | 第15-19页 |
| 1.1 丰产素在生防菌防治作物病害中的功能作用 | 第15-16页 |
| 1.2 丰产素的化学结构及生物合成过程 | 第16-18页 |
| 1.3 丰产素的作用机理 | 第18-19页 |
| 1.4 丰产素相关调控基因 | 第19页 |
| 2 枯草芽胞杆菌的竞争作用 | 第19-23页 |
| 2.1 枯草芽胞杆菌生物膜 | 第19-21页 |
| 2.2 枯草芽胞杆菌生物膜调控系统 | 第21-23页 |
| 3 基因芯片技术 | 第23-24页 |
| 3.1 基因芯片技术原理 | 第23页 |
| 3.2 基因芯片的应用 | 第23-24页 |
| 4 细胞表型芯片技术 | 第24-27页 |
| 4.1 表型芯片技术的工作原理 | 第25-26页 |
| 4.2 PM平板的种类 | 第26-27页 |
| 4.3 表型芯片技术应用 | 第27页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第一章 群体感应调控因子ComA对枯草芽胞杆菌NCD-2菌株抑菌物质产生和生物膜形成的影响 | 第28-45页 |
| 1 材料和方法 | 第28-39页 |
| 1.1 材料 | 第28-31页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 1.1.2 培养基和培养条件 | 第29页 |
| 1.1.3 试剂和仪器 | 第29-31页 |
| 1.1.4 试剂 | 第31页 |
| 1.2 试验方法 | 第31-39页 |
| 1.2.1 DNA测序和序列分析 | 第31页 |
| 1.2.2 枯草芽胞杆菌NCD-2 基因组DNA的小量提取 | 第31-32页 |
| 1.2.3 DNA的纯化 | 第32页 |
| 1.2.4 E.coli DH5α 感受态细胞的大量制备 | 第32-33页 |
| 1.2.5 质粒的小量提取 | 第33页 |
| 1.2.6 质粒热激转化E.coli DH5α | 第33页 |
| 1.2.7 DNA片段的纯化回收 | 第33-34页 |
| 1.2.8 comA内缺失突变盒及缺失突变载体的构建 | 第34-35页 |
| 1.2.9 枯草芽胞杆菌的原生质体转化 | 第35-36页 |
| 1.2.10 转化子的验证 | 第36页 |
| 1.2.11 突变子的筛选 | 第36页 |
| 1.2.12 NCD-2 菌株胞外酶活性的测定 | 第36-37页 |
| 1.2.13 NCD-2 菌株生物膜形成能力测定 | 第37页 |
| 1.2.14 细菌总RNA的提取、纯化 | 第37-38页 |
| 1.2.15 实时荧光定量PCR分析目标基因在野生型菌株和突变子中的表达差异 | 第38页 |
| 1.2.16 NCD-2 菌株抑菌活性测定 | 第38-39页 |
| 1.2.17 脂肽类抑菌物质的提取 | 第39页 |
| 1.2.18 脂肽类物质的分离纯化 | 第39页 |
| 1.2.19 脂肽类物质的的抑菌测定 | 第39页 |
| 1.2.20 数据分析 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-43页 |
| 2.1 NCD-2 菌株comA基因缺失突变子的获得 | 第39-40页 |
| 2.2 NCD-2 菌株胞外酶活性和抑菌活性 | 第40-41页 |
| 2.3 NCD-2 菌株脂肽提取物的色谱分析 | 第41-42页 |
| 2.4 NCD-2 菌株生物膜的形成能力 | 第42页 |
| 2.5 生物膜胞外基质编码基因的RT-qPCR分析 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 第二章 枯草芽胞杆菌NCD-2 菌株中多效调控因子DegQ调控丰产素合成和生物膜形成 | 第45-64页 |
| 1 材料和方法 | 第45-53页 |
| 1.1 材料 | 第45-48页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第45-46页 |
| 1.1.2 培养基和培养条件 | 第46-47页 |
| 1.1.3 主要试剂和仪器 | 第47-48页 |
| 1.2 方法 | 第48-53页 |
| 1.2.1 degQ缺失突变载体的构建 | 第48-49页 |
| 1.2.2 突变子的获得 | 第49页 |
| 1.2.3 互补载体的构建 | 第49-50页 |
| 1.2.4 互补菌株的获得 | 第50页 |
| 1.2.5 NCD-2 菌株胞外酶活性的测定 | 第50页 |
| 1.2.6 NCD-2 菌株的抑菌测定 | 第50-51页 |
| 1.2.7 脂肽类抑菌物质的提取 | 第51页 |
| 1.2.8 脂肽类物质的分离纯化 | 第51页 |
| 1.2.9 脂肽提取物的抑菌测定 | 第51页 |
| 1.2.10 脂肽提取物对离体叶片的保护作用 | 第51页 |
| 1.2.11 细菌总RNA的提取、纯化、质量检测 | 第51页 |
| 1.2.12 实时荧光定量PCR分析目标基因在不同菌株中的表达差异 | 第51页 |
| 1.2.13 NCD-2 菌株菌落形态观察 | 第51页 |
| 1.2.14 NCD-2 菌株生物膜的测定 | 第51-52页 |
| 1.2.15 NCD-2 菌株细胞表型芯片分析 | 第52页 |
| 1.2.16 数据分析 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-61页 |
| 2.1 NCD-2 菌株degQ突变子的获得 | 第53-54页 |
| 2.2 NCD-2 菌株胞外酶活性 | 第54-55页 |
| 2.3 NCD-2 菌株及其脂肽提取物的抑菌活性 | 第55-56页 |
| 2.4 NCD-2 菌株脂肽提取物的高效液相色谱分析 | 第56页 |
| 2.5 丰产素合成酶基因的RT-qPCR分析 | 第56-57页 |
| 2.6 NCD-2 菌株菌落形态 | 第57-58页 |
| 2.7 NCD-2 菌株生物膜形成能力 | 第58页 |
| 2.8 NCD-2 菌株的细胞表型芯片分析 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 4 小结 | 第63-64页 |
| 第三章 ywbB基因对枯草芽胞杆菌NCD-2 菌株生物膜形成的影响 | 第64-86页 |
| 1 材料和方法 | 第64-70页 |
| 1.1 材料 | 第64-67页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第64-65页 |
| 1.1.2 培养基和培养条件 | 第65页 |
| 1.1.3 主要试剂和仪器 | 第65-67页 |
| 1.1.4 溶液、缓冲液及试剂配制 | 第67页 |
| 1.2 方法 | 第67-70页 |
| 1.2.1 引物的设计 | 第67页 |
| 1.2.2 DNA测序和序列分析 | 第67页 |
| 1.2.3 NCD-2 基因组DNA提取及纯化 | 第67页 |
| 1.2.4 E.coli DH5α 感受态细胞的大量制备 | 第67页 |
| 1.2.5 质粒的小量提取 | 第67页 |
| 1.2.6 质粒热激转化E.coli DH5α | 第67页 |
| 1.2.7 PCR产物或者酶切产物的纯化 | 第67页 |
| 1.2.8 PCR产物的胶回收 | 第67-68页 |
| 1.2.9 基因缺失突变载体的构建 | 第68页 |
| 1.2.10 原生质体转化 | 第68页 |
| 1.2.11 转化子的验证 | 第68页 |
| 1.2.12 突变子的筛选 | 第68页 |
| 1.2.13 生物膜的测定 | 第68页 |
| 1.2.14 细菌总RNA的提取、纯化和质量检测 | 第68页 |
| 1.2.15 目的基因的RT-qPCR分析 | 第68-69页 |
| 1.2.16 基因芯片检测野生型菌株NCD-2 和突变子之间差异表达的基因 | 第69页 |
| 1.2.17 NCD-2 菌株对棉花立枯病的防效测定 | 第69页 |
| 1.2.18 NCD-2 菌株的根际定殖能力测定 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-83页 |
| 2.1 NCD-2 菌株tasA epsA基因的表达分析 | 第70页 |
| 2.2 基因芯片技术分析生物膜状态下受ywbB调控的基因 | 第70-71页 |
| 2.3 与生物膜形成相关且受ywbB调控的基因分析 | 第71-74页 |
| 2.4 目的基因的RT-qPCR验证 | 第74-76页 |
| 2.4.1 最佳退火温度的摸索 | 第74-75页 |
| 2.4.2 标准曲线的建立 | 第75-76页 |
| 2.5 NCD-2 菌株基因缺失突变子的获得 | 第76-80页 |
| 2.5.1 基因缺失突变载体的获得 | 第76-78页 |
| 2.5.2 基因缺失突变子的获得 | 第78-80页 |
| 2.6 NCD-2 菌株菌落形态 | 第80页 |
| 2.7 NCD-2 菌株生物膜形成能力 | 第80-82页 |
| 2.8 NCD-2 菌株及突变子抑菌活性 | 第82页 |
| 2.9 NCD-2 菌株根际定殖能力 | 第82-83页 |
| 2.10 NCD-2 菌株对立枯丝核病菌的防效 | 第83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 4 小结 | 第85-86页 |
| 第四章 结论 | 第86-87页 |
| 1 主要研究结论 | 第86页 |
| 2 深入研究工作的建议 | 第86-87页 |
| 附录 A | 第87-88页 |
| 附录 B | 第88-89页 |
| 附录 C | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第98-99页 |
| 作者简历 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
