| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1. 5-氨基乙酰丙酸 | 第12-19页 |
| 1.1. ALA简介 | 第12-13页 |
| 1.2. ALA的生物合成途径 | 第13-15页 |
| 1.3. 微生物合成ALA的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1. 光合细菌合成ALA的研究进展 | 第15页 |
| 1.3.2. 引入C4途径在大肠杆菌中合成ALA的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.3. 影响C4途径生物合成ALA的因素 | 第18-19页 |
| 2. 本课题的立题依据 | 第19-22页 |
| 第二章 不同遗传背景大肠杆菌对ALA产量的影响 | 第22-48页 |
| 1. 引言 | 第22-23页 |
| 2. 实验材料 | 第23-31页 |
| 2.1. 菌株、质粒与引物 | 第23-24页 |
| 2.2. 常用生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.3. 本论文中所使用的试剂盒 | 第25页 |
| 2.4. 培养基与主要试剂 | 第25-29页 |
| 2.5. 仪器与设备 | 第29-31页 |
| 3. 实验方法 | 第31-39页 |
| 3.1. 分子生物学实验常规操作 | 第31-36页 |
| 3.1.1. 细菌基因组的提取 | 第31页 |
| 3.1.2. 质粒DNA提取 | 第31页 |
| 3.1.3. PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3.1.4. PCR产物的纯化 | 第32页 |
| 3.1.5. 琼脂糖凝胶产物的纯化 | 第32页 |
| 3.1.6. E.coli普通感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| 3.1.7. 重组子的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.8. 体外组装方法 | 第34-35页 |
| 3.1.9. 质粒载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.2. 发酵方法 | 第36页 |
| 3.3. 检测方法 | 第36-39页 |
| 3.3.1. 葡萄糖浓度的测定 | 第36-37页 |
| 3.3.2. 细菌生长情况检测 | 第37页 |
| 3.3.3. ALA的检测方法 | 第37页 |
| 3.3.4. 甘氨酸的检测方法 | 第37-39页 |
| 3.3.5. 高效液相色谱法对副产物含量的检测 | 第39页 |
| 4. 结果与讨论 | 第39-47页 |
| 4.1. ALA标准曲线的绘制 | 第39-40页 |
| 4.2. ALA合酶表达载体的构建 | 第40页 |
| 4.3. 摇瓶条件下不同遗传背景大肠杆菌发酵生产ALA的能力及对菌体代谢的影响 | 第40-43页 |
| 4.4. 提高溶氧下不同遗传背景大肠杆菌发酵生产ALA的能力及对菌体代谢的影响 | 第43-45页 |
| 4.5. 不同来源ALA合酶对KNSP菌株ALA合成能力的影响研究 | 第45-47页 |
| 5. 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 琥珀酸生产菌微好氧或厌氧发酵生产ALA | 第48-62页 |
| 1. 引言 | 第48-50页 |
| 2. 实验材料 | 第50-51页 |
| 2.1. 菌株和质粒 | 第50页 |
| 2.2. 引物 | 第50-51页 |
| 2.3. 培养基及主要试剂 | 第51页 |
| 3. 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.1. 发酵方法 | 第51-52页 |
| 3.2. 质粒构建 | 第52-53页 |
| 4. 结果与讨论 | 第53-60页 |
| 4.1. sucCD和cat1表达载体的构建 | 第53页 |
| 4.2. YL106A菌株微好氧条件下ALA生产能力研究 | 第53-54页 |
| 4.3. cat1基因过表达能够提高微好氧下ALA产率和生产速率 | 第54-56页 |
| 4.4. YL106A菌株好氧-厌氧双阶段条件下ALA生产能力研究 | 第56-58页 |
| 4.5. 不同来源ALA合酶对YL106菌株ALA合成的影响 | 第58-59页 |
| 4.6. YL106A 5L罐发酵结果 | 第59-60页 |
| 5. 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 利用大肠杆菌C4途径以葡萄糖为唯一碳源生产ALA | 第62-72页 |
| 1. 引言 | 第62-63页 |
| 2. 实验材料 | 第63-64页 |
| 3. 发酵方法 | 第64页 |
| 4. 结果与讨论 | 第64-70页 |
| 4.1 5 SABC菌株ALA合成能力的探究 | 第64-66页 |
| 4.2 不同来源ALA合酶对5Sp菌株ALA合成能力 | 第66-67页 |
| 4.3 叶酸、磷酸吡哆醛、谷氨酸对5SRPO菌株合成ALA能力的影响 | 第67-70页 |
| 5. 本章小结 | 第70-72页 |
| 主要成果 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 附件 | 第80页 |
