摘要 | 第6-7页 |
abstract | 第7-8页 |
英文缩略表 | 第12-13页 |
第一章 概述 | 第13-20页 |
1.1 新城疫病毒的概述 | 第13-14页 |
1.2 树突状细胞的内吞途径及其抗原递呈方式 | 第14-15页 |
1.3 细胞内吞方式的概述 | 第15-18页 |
1.3.1 网格蛋白介导的内吞途径(CME) | 第15-16页 |
1.3.2 小窝蛋白介导的内吞途径(CavME) | 第16页 |
1.3.3 巨胞饮(macropinocytosis) | 第16-17页 |
1.3.4 调节巨胞饮途径的相关分子 | 第17-18页 |
1.4 巨胞饮体的闭合、运输和成熟 | 第18-19页 |
1.5 总结 | 第19-20页 |
第二章 NDV通过网格蛋白介导的内吞途径感染细胞 | 第20-33页 |
2.1 实验材料 | 第20-21页 |
2.1.1 病毒和细胞 | 第20页 |
2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
2.2 实验方法 | 第21-23页 |
2.2.1 骨髓源树突状细胞的制备及体外培养 | 第21页 |
2.2.2 NDV感染细胞实验 | 第21页 |
2.2.3 细胞样品的收集 | 第21页 |
2.2.4 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第21-22页 |
2.2.5 间接免疫荧光(IFA) | 第22页 |
2.2.6 siRNA的设计与合成 | 第22页 |
2.2.7 TCID50测定 | 第22页 |
2.2.8 药物细胞毒性的检测 | 第22-23页 |
2.2.9 CPZ、MβCD和Dynasore药物抑制实验 | 第23页 |
2.2.10 Tf和CTxB的入胞检测实验 | 第23页 |
2.2.11 siRNA干扰及功能验证 | 第23页 |
2.3 实验结果 | 第23-31页 |
2.3.1 NDV能够感染DF1细胞和DCs并进行复制 | 第23-26页 |
2.3.2 NDV通过网格蛋白介导的内吞途径感染细胞 | 第26-28页 |
2.3.3 NDV感染细胞是依赖dynamin而不依赖胆固醇 | 第28-31页 |
2.4 讨论 | 第31-33页 |
第三章 NDV通过巨胞饮途径感染细胞 | 第33-39页 |
3.1 实验材料 | 第33-34页 |
3.1.1 病毒和细胞 | 第33页 |
3.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
3.1.3 主要仪器 | 第34页 |
3.2 实验方法 | 第34页 |
3.2.1 Jasplakinolide、Cyto D和EIPA药物抑制实验 | 第34页 |
3.2.2 Dextran的入胞检测实验 | 第34页 |
3.2.3 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第34页 |
3.2.4 间接免疫荧光实验(IFA) | 第34页 |
3.3 实验结果 | 第34-38页 |
3.3.1 NDV感染DF1细胞的过程中发生的actin的重排 | 第34-36页 |
3.3.2 NDV通过激活NHE产生巨胞饮作用 | 第36-37页 |
3.3.3 NDV利用巨胞饮途径进入DCs | 第37-38页 |
3.4 讨论 | 第38-39页 |
第四章 NDV感染细胞后激活PKC和RAC1-PAK信号通路 | 第39-48页 |
4.1 实验材料 | 第39-40页 |
4.1.1 病毒和细胞 | 第39页 |
4.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
4.1.3 主要仪器 | 第40页 |
4.2 实验方法 | 第40-41页 |
4.2.1 Rottlerin、PMA、wortmannin和Rac1 Inhibitor药物抑制实验 | 第40页 |
4.2.2 激活型Rac1的检测 | 第40页 |
4.2.3 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第40页 |
4.2.4 间接免疫荧光(IFA) | 第40-41页 |
4.3 实验结果 | 第41-45页 |
4.3.1 PKC和PI3K对NDV感染细胞的影响 | 第41-43页 |
4.3.2 NDV感染细胞后激活Rac1-Pak1信号通路 | 第43-45页 |
4.4 讨论 | 第45-48页 |
第五章 巨胞饮体依赖RAB5A进行细胞内的运输 | 第48-56页 |
5.1 实验材料 | 第48-49页 |
5.1.1 病毒和细胞 | 第48-49页 |
5.1.2 主要试剂 | 第49页 |
5.1.3 主要仪器 | 第49页 |
5.2 实验方法 | 第49-52页 |
5.2.1 Rab5a、Rab7及其突变体的真核表达质粒的构建 | 第49-51页 |
5.2.2 Rab5a、Rab7及其突变体的真核表达质粒的转染及其转染效率的鉴定 | 第51页 |
5.2.3 NH4CL和Baf A1药物抑制实验 | 第51页 |
5.2.4 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第51页 |
5.2.5 间接免疫荧光(IFA) | 第51-52页 |
5.3 实验结果 | 第52-54页 |
5.3.1 NDV感染细胞是pH依赖性的途径 | 第52-53页 |
5.3.2 Rab5a、Rab7及其突变体的真核表达质粒的构建 | 第53页 |
5.3.3 NDV感染DF1细胞后巨胞饮体通过依赖Rab5a的方式进入早期内体 | 第53-54页 |
5.4 讨论 | 第54-56页 |
第六章 全文结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-63页 |
附录 | 第63-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
作者简历 | 第65页 |