| 致谢 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-45页 |
| 1.鱼类细胞培养研究进展及应用 | 第18-35页 |
| 1.1 鱼类细胞培养及细胞系建立概况 | 第18-19页 |
| 1.2 鱼类细胞培养技术与方法 | 第19-21页 |
| 1.2.1 鱼类细胞原代培养 | 第20-21页 |
| 1.2.2 鱼类细胞传代培养 | 第21页 |
| 1.3 鱼类细胞体外生长所需的条件 | 第21-24页 |
| 1.3.1 鱼类细胞培养营养组成 | 第21-23页 |
| 1.3.2 鱼类细胞培养生长条件 | 第23-24页 |
| 1.4 鱼类细胞冻存和复苏 | 第24-25页 |
| 1.5 鱼类细胞系鉴定 | 第25-28页 |
| 1.5.1 形态学鉴定 | 第25页 |
| 1.5.2 染色体核型鉴定 | 第25-27页 |
| 1.5.3 分子生物学方法鉴定 | 第27-28页 |
| 1.5.4 细胞生长状态鉴定 | 第28页 |
| 1.6 鱼类细胞培养过程中的交叉污染和过度传代问题 | 第28-29页 |
| 1.7 鱼类细胞系的应用价值 | 第29-35页 |
| 1.7.1 鱼类细胞系在病毒学中的应用 | 第29-30页 |
| 1.7.2 鱼类细胞系在毒理学中的应用 | 第30-31页 |
| 1.7.3 鱼类细胞系在免疫学中的应用 | 第31-32页 |
| 1.7.4 鱼类细胞系在生理学中的应用 | 第32-33页 |
| 1.7.5 鱼类细胞系在内分泌学中的应用 | 第33页 |
| 1.7.6 鱼类细胞系在遗传学和资源保护中的应用 | 第33-34页 |
| 1.7.7 鱼类细胞系在基因筛选与功能分析中的应用 | 第34-35页 |
| 2.鱼类性别决定 | 第35-40页 |
| 2.1 遗传型性别决定 | 第35-38页 |
| 2.1.1 鱼类性染色体决定类型 | 第35-36页 |
| 2.1.2 鱼类性别相关基因 | 第36-38页 |
| 2.2 外源因子在鱼类性别分化中的作用 | 第38-40页 |
| 2.2.1 温度对鱼类性别分化的影响 | 第38-40页 |
| 2.2.2 外源性激素对鱼类性别分化的影响 | 第40页 |
| 3.鱼类性别相关的表观遗传学研究 | 第40-43页 |
| 3.1 表观遗传学的定义 | 第40-42页 |
| 3.2 DNA甲基化研究进展 | 第42-43页 |
| 4.研究背景及目的和意义 | 第43-45页 |
| 第二章 褐牙鲆三种细胞系的建立、鉴定及初步应用 | 第45-84页 |
| 1.褐牙鲆精巢细胞系的建立、鉴定及应用 | 第45-60页 |
| 1.1 前言 | 第45-46页 |
| 1.2 材料与方法 | 第46-52页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第46页 |
| 1.2.2 实验试剂与仪器设备 | 第46-47页 |
| 1.2.3 原代培养 | 第47页 |
| 1.2.4 传代培养 | 第47-48页 |
| 1.2.5 细胞冻存与复苏 | 第48页 |
| 1.2.6 细胞生长曲线的绘制 | 第48页 |
| 1.2.7 染色体核型分析 | 第48-49页 |
| 1.2.8 细胞系的物种鉴定 | 第49-50页 |
| 1.2.9 细胞系的分子鉴定 | 第50-52页 |
| 1.2.10 细胞系的免疫组化分析 | 第52页 |
| 1.2.11 利用pEGFP-N3质粒进行细胞系转染效率测定 | 第52页 |
| 1.3 实验结果 | 第52-58页 |
| 1.3.1 原代培养和传代培养 | 第52-53页 |
| 1.3.2 细胞系的冻存和复苏 | 第53页 |
| 1.3.3 细胞生长曲线的测定 | 第53-54页 |
| 1.3.4 细胞染色体核型分析 | 第54-55页 |
| 1.3.5 细胞系的物种鉴定 | 第55页 |
| 1.3.6 细胞系的分子鉴定 | 第55-56页 |
| 1.3.7 细胞系的免疫细胞化学分析 | 第56-57页 |
| 1.3.8 pEGFP-N3质粒转染细胞系 | 第57-58页 |
| 1.4 讨论 | 第58-60页 |
| 2.褐牙鲆卵巢细胞系的建立、鉴定及应用 | 第60-70页 |
| 2.1 前言 | 第60页 |
| 2.2 材料与方法 | 第60-64页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 2.2.2 实验试剂与仪器设备 | 第61页 |
| 2.2.3 原代培养 | 第61页 |
| 2.2.4 传代培养 | 第61页 |
| 2.2.5 细胞冻存与复苏 | 第61-62页 |
| 2.2.6 细胞生长曲线的绘制 | 第62页 |
| 2.2.7 染色体核型分析 | 第62页 |
| 2.2.8 细胞系的物种鉴定 | 第62-63页 |
| 2.2.9 细胞系的免疫组化分析 | 第63页 |
| 2.2.10 利用pEGFP-N3质粒转染对细胞系进行应用测定 | 第63-64页 |
| 2.3 结果 | 第64-68页 |
| 2.3.1 原代培养和传代培养 | 第64页 |
| 2.3.2 细胞系的冻存和复苏 | 第64页 |
| 2.3.3 细胞生长曲线的测定 | 第64-65页 |
| 2.3.4 细胞染色体核型分析 | 第65-66页 |
| 2.3.5 细胞系的物种鉴定 | 第66页 |
| 2.3.6 细胞系的免疫细胞化学分析 | 第66-67页 |
| 2.3.7 pEGFP-N3质粒转染细胞系 | 第67-68页 |
| 2.4 讨论 | 第68-70页 |
| 3.三倍体褐牙鲆肌肉细胞系的建立、鉴定及应用 | 第70-84页 |
| 3.1 前言 | 第70-71页 |
| 3.2 材料与方法 | 第71-75页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第71页 |
| 3.2.2 实验试剂与仪器设备 | 第71页 |
| 3.2.3 原代培养 | 第71-72页 |
| 3.2.4 传代培养 | 第72页 |
| 3.2.5 细胞冻存与复苏 | 第72页 |
| 3.2.6 细胞生长曲线的绘制 | 第72-73页 |
| 3.2.7 染色体核型分析 | 第73页 |
| 3.2.8 细胞系的分子鉴定 | 第73-74页 |
| 3.2.9 细胞系的免疫组化分析 | 第74-75页 |
| 3.2.10 三倍体褐牙鲆肌肉细胞系分化潜能检测 | 第75页 |
| 3.2.11 pEGFP-N3质粒转染对细胞系进行应用测定 | 第75页 |
| 3.3 实验结果 | 第75-81页 |
| 3.3.1 原代培养和继代培养 | 第75-76页 |
| 3.3.2 细胞系的冻存和复苏 | 第76页 |
| 3.3.3 细胞生长曲线的测定 | 第76-77页 |
| 3.3.4 三倍体肌肉细胞系染色体分析 | 第77-78页 |
| 3.3.5 细胞系的分子鉴定 | 第78页 |
| 3.3.6 细胞系的免疫细胞化学分析 | 第78-79页 |
| 3.3.7 细胞分化潜能检测 | 第79-81页 |
| 3.3.8 pEGFP-N3质粒转染细胞系 | 第81页 |
| 3.4 讨论 | 第81-84页 |
| 第三章 褐牙鲆dnmt3a和dnmt3b基因克隆与表达模式分析 | 第84-114页 |
| 1.甲基转移酶基因dnmt3a和dnmt3b的克隆 | 第84-103页 |
| 1.1 前言 | 第84-85页 |
| 1.2 材料与方法 | 第85-97页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第85页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第85-86页 |
| 1.2.3 仪器设备 | 第86页 |
| 1.2.4 感受态细胞的制备（见附录 1） | 第86页 |
| 1.2.5 Dnmt3a和dnmt3b基因中间片段的获得 | 第86-90页 |
| 1.2.6 Dnmt3a和dnmt3b基因cDNA全长的获得 | 第90-97页 |
| 1.2.7 生物信息学分析 | 第97页 |
| 1.3 结果 | 第97-103页 |
| 1.3.1 Dnmt3a和dnmt3b基因序列分析 | 第97-98页 |
| 1.3.2 Dnmt3a和Dnmt3b蛋白理化性质初步分析 | 第98页 |
| 1.3.3 Dnmt3a和dnmt3b不同转录本之间氨基酸序列比对分析 | 第98-99页 |
| 1.3.4 Dnmt3a和dnmt3b基因的系统发育进化分析 | 第99-103页 |
| 2.褐牙鲆dnmt3a、dnmt3b与dmrt1基因的表达及相关性 | 第103-114页 |
| 2.1 前言 | 第103-104页 |
| 2.2 材料与方法 | 第104-109页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第104页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第104页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第104页 |
| 2.2.4 雌核发育褐牙鲆幼苗激素和高温处理 | 第104-105页 |
| 2.2.5 褐牙鲆幼鱼性腺总RNA提取和cDNA模板制备 | 第105-107页 |
| 2.2.6 Dnmt3a和dnmt3b以及dmrt1在褐牙鲆幼鱼性腺分化期的表达 | 第107-109页 |
| 2.3 结果 | 第109-111页 |
| 2.3.1 雌二醇和高温处理后雌核发育褐牙鲆的性别比例分析 | 第109页 |
| 2.3.2 Dmrt1与dnmt3a和dnmt3b在雌核发育褐牙鲆幼鱼性腺分化期的差异表达谱 | 第109-111页 |
| 2.4 讨论 | 第111-114页 |
| 结论 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-140页 |
| 附录 | 第140-144页 |
| 作者简介 | 第144-145页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第145页 |
