| 摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分：CRKL与miR-429 在临床样本中的相关性 | 第17-30页 |
| 材料和方法 | 第17-23页 |
| 1.实验材料 | 第17-18页 |
| 1.1 细胞系及临床样本 | 第17页 |
| 1.2 试剂及仪器 | 第17-18页 |
| 2.实验方法 | 第18-23页 |
| 2.1 WB测定新鲜肾癌组织中CRKL水平 | 第18-19页 |
| 2.2 qRT-PCR测定新鲜肾癌组织中miR-429 水平 | 第19-20页 |
| 2.3 miR-429 表达变化对 786-O细胞的迁移、侵袭能力的影响 | 第20-22页 |
| 2.4 CRKL表达变化对 786-O细胞的迁移、侵袭能力的影响 | 第22页 |
| 2.5 统计学分析 | 第22-23页 |
| 结果 | 第23-27页 |
| 1.CRKL蛋白表达水平在肾癌组织中明显上调 | 第23页 |
| 2.miR-429 的表达水平在肾癌组织中明显下调 | 第23-24页 |
| 3.miR-429 表达变化对 786-O细胞的迁移、侵袭能力的影响 | 第24-25页 |
| 4.CRKL表达变化对 786-O细胞的迁移、侵袭能力的影响 | 第25-27页 |
| 讨论 | 第27-28页 |
| 结论 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-30页 |
| 第二部分：miR-429 与CRKL的靶向调控相关性 | 第30-44页 |
| （一）材料和方法 | 第30-38页 |
| 1. 实验材料 | 第30-31页 |
| 1.1 细胞株及菌株 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第30-31页 |
| 2.实验方法 | 第31-38页 |
| 2.1 构建含CRKL 3’-UTR区的双荧光素报告基因表达质粒 | 第31-36页 |
| 2.2 双荧光素酶报告实验确定miR-429 与CRKL3’-UTR靶向结合位点 | 第36-37页 |
| 2.3 共转染实验确定mi R-429 不参与调控CRKLCDS区域 | 第37-38页 |
| 2.4 统计学分析 | 第38页 |
| （二）结果 | 第38-41页 |
| 1.成功扩增CRKL3’UTR区产物PCR | 第38-39页 |
| 2.成功构建psiCHECK-2.0-CRKL双荧光素酶载体 | 第39-40页 |
| 3.miR-429 能靶向结合于CRKL 3’-UTR区域 | 第40页 |
| 4.miR-429 不参与CRKL CDS区域的调控 | 第40-41页 |
| （三）讨论 | 第41-42页 |
| （四）结论 | 第42-43页 |
| （五）参考文献 | 第43-44页 |
| 第三部分：miR-429 与CRKL相互关系在细胞运动中的作用机制 | 第44-52页 |
| （一）材料和方法 | 第44-46页 |
| 1. 实验材料 | 第44页 |
| 1.1 细胞系及培养条件 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第44页 |
| 2.实验方法 | 第44-46页 |
| 2.1 WB法分析miR-429 对TGF-β 诱导激活CRKL表达的调控作用 | 第44-45页 |
| 2.2 Transwell小室法测定mi R-429 对TGF-β 诱导 786-O迁移能力的影响 | 第45页 |
| 2.3 Transwell小室法分析mi R-429 对TGF-β 诱导 786-O侵袭能力的影响 | 第45页 |
| 2.4 免疫共沉淀实验探究CRKL与CRKⅡ相互作用 | 第45页 |
| 2.5 鬼笔环肽染色法考察CRKL水平变化对 786-O骨架影响 | 第45-46页 |
| （二）结果 | 第46-49页 |
| 1.miR-429 能抑制 786-O细胞经TGF-β 诱导激活的CRKL表达 | 第46页 |
| 2.miR-429 能抑制 786-O细胞经TGF-β 诱导促进的迁移能力 | 第46-47页 |
| 3.miR-429 能抑制 786-O细胞经TGF-β 诱导促进的侵袭能力 | 第47-48页 |
| 4.miR-429 能影响 786-O细胞内CRKL与CRKⅡ的相互作用 | 第48页 |
| 5.miR-429 表达水平能影响 786-O细胞骨架 | 第48-49页 |
| （三）讨论 | 第49-50页 |
| （四）结论 | 第50-51页 |
| （五）参考文献 | 第51-52页 |
| 综述 | 第52-60页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
