| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 主要缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-19页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-17页 |
| 1.1.1 肝癌 | 第13页 |
| 1.1.2 蛋白质精氨酸甲基转移酶 5 | 第13-15页 |
| 1.1.3 上皮间质转化 | 第15-16页 |
| 1.1.4 SNAIL | 第16-17页 |
| 1.2 本研究的目的、内容、方法与技术路线 | 第17-19页 |
| 1.2.1 研究目的 | 第17页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 1.2.3 研究技术路线图 | 第18页 |
| 1.2.4 研究意义 | 第18-19页 |
| 第二章 载体构建与鉴定、慢病毒包装、稳转细胞株筛选 | 第19-41页 |
| 2.1 实验仪器和材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验耗材 | 第20页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-36页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第23-25页 |
| 2.2.2 DH5α/ Stbl3感受态细胞制备方法 | 第25-26页 |
| 2.2.3 重组慢病毒sh-GFP及sh-PRMT5载体构建 | 第26-30页 |
| 2.2.4 包装病毒 | 第30-31页 |
| 2.2.5 感染细胞 | 第31页 |
| 2.2.6 总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.2.7 qPCR检测方法 | 第32-33页 |
| 2.2.8 Western Blot检测方法 | 第33-36页 |
| 2.3 数据处理与统计方法 | 第36页 |
| 2.4 结果 | 第36-39页 |
| 2.4.1 检测三种不同肝癌细胞系中PRMT5的表达 | 第36页 |
| 2.4.2 pLKO.1-TRC质粒双酶切 | 第36-37页 |
| 2.4.3 菌液PCR鉴定重组质粒sh-PRMT5 | 第37页 |
| 2.4.4 sh-PRMT5质粒测序结果 | 第37-38页 |
| 2.4.5 检测sh- PRMT5干扰效率 | 第38-39页 |
| 2.5 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 PRMT5对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭的影响 | 第41-51页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第41页 |
| 3.1.2 实验耗材 | 第41页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 质粒转染 | 第42页 |
| 3.2.2 CCK-8 实验 | 第42-43页 |
| 3.2.3 平板克隆形成实验 | 第43页 |
| 3.2.4 Transwell迁移实验 | 第43页 |
| 3.2.5 Transwell侵袭实验 | 第43-44页 |
| 3.2.6 细胞培养、Western blot | 第44页 |
| 3.3 数据处理与统计方法 | 第44页 |
| 3.4 结果 | 第44-49页 |
| 3.4.1 CCK-8 法检测PRMT5对肝癌细胞增殖能力的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.2 平板克隆形成实验检测PRMT5对肝癌细胞克隆形成能力的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.3 Transwell迁移实验检测PRMT5对肝癌细胞迁移能力的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4 Transwell侵袭实验检测PRMT5对肝癌细胞侵袭能力的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.5 Western Blot检测PRMT5对侵袭相关蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 PRMT5对肝癌细胞EMT的影响及其分子机制 | 第51-61页 |
| 4.1 实验仪器和材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第52页 |
| 4.1.2 实验耗材 | 第52页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第52-53页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 免疫荧光 | 第53页 |
| 4.2.2 细胞核与细胞浆蛋白分离提取 | 第53-54页 |
| 4.2.3 质粒转染、细胞培养、Western blot | 第54页 |
| 4.3 数据处理与统计方法 | 第54页 |
| 4.4 结果 | 第54-58页 |
| 4.4.1 Western Blot检测PRMT5对EMT相关蛋白的影响 | 第54-56页 |
| 4.4.2 免疫荧光检测PRMT5对SNAIL亚细胞定位的影响 | 第56-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58-61页 |
| 结论与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 综述 | 第70-77页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
