| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 一、绪论 | 第8-18页 |
| 1 抗生素及其危害 | 第8-9页 |
| 1.1 抗生素的概念 | 第8-9页 |
| 1.2 抗生素的危害 | 第9页 |
| 2 抗菌肽的研究进展 | 第9-13页 |
| 2.1 抗菌肽的概念 | 第9页 |
| 2.2 抗菌肽的分类 | 第9页 |
| 2.3 抗菌肽的来源 | 第9-10页 |
| 2.4 抗菌肽的特点 | 第10页 |
| 2.5 抗菌肽的作用机制 | 第10-12页 |
| 2.6 抗菌肽的研究进展 | 第12-13页 |
| 3 羊源抗菌肽SMAP-29 | 第13-14页 |
| 3.1 羊源抗菌肽SMAP-29的生物功能 | 第14页 |
| 3.2 羊源抗菌肽SMAP-29的抗菌机制 | 第14页 |
| 3.3 羊源抗菌肽SMAP-29的研究进展 | 第14页 |
| 4 质粒 | 第14-17页 |
| 5 原核表达系统 | 第17页 |
| 6 技术路线 | 第17-18页 |
| 二、实验部分 | 第18-33页 |
| 1 实验材料 | 第18-22页 |
| 1.1 实验仪器及设备 | 第18页 |
| 1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 1.3 主要试剂盒及工具酶 | 第19页 |
| 1.4 载体与菌株 | 第19-20页 |
| 1.5 主要试剂配制方法 | 第20-22页 |
| 1.6 分析工具 | 第22页 |
| 1.7 引物设计与合成 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.1 羊源抗菌肽SMAP-29氨基酸序列的分析及改造 | 第22-23页 |
| 2.2 改造前后抗菌肽SMAP-29基因序列的合成 | 第23-24页 |
| 2.2.1 抗菌肽氨基酸序列的反翻译 | 第23-24页 |
| 2.2.2 抗菌肽DNA序列的限制性内切酶位点设计 | 第24页 |
| 2.2.3 目的基因的检测 | 第24页 |
| 2.3 重组表达载体的构建 | 第24-28页 |
| 2.3.1 目的基因的磷酸化、复性 | 第24-25页 |
| 2.3.2 目的基因的纯化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 制备双酶切产物并连接 | 第26-27页 |
| 2.3.4 制备感受态宿主细胞DH5α | 第27页 |
| 2.3.5 感受态细胞中转入连接产物 | 第27页 |
| 2.3.6 阳性克隆子的筛选及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4 重组质粒的诱导表达及其产物的SDS-PAGE鉴定 | 第28-30页 |
| 2.4.1 制备感受态表达宿主细胞BL21(DE3) | 第28-29页 |
| 2.4.2 重组质粒转化感受态细胞 | 第29页 |
| 2.4.3 阳性克隆子的筛选 | 第29页 |
| 2.4.4 IPTG诱导蛋白表达 | 第29页 |
| 2.4.5 融合蛋白的SDS-PAGE鉴定分析 | 第29-30页 |
| 2.5 设计抗菌肽SMAP-29的分离及纯化 | 第30-32页 |
| 2.5.1 羊源抗菌肽的分离 | 第30-31页 |
| 2.5.2 羊源抗菌肽的分离及纯化 | 第31-32页 |
| 2.6 改造前、后抗菌肽抗菌活性鉴定 | 第32页 |
| 2.7 改造前、后抗菌肽溶血活性鉴定 | 第32-33页 |
| 三、实验结果及讨论 | 第33-52页 |
| 1 实验结果 | 第33-48页 |
| 1.1 羊源抗菌肽SMAP-29氨基酸序列的分析及改造结果 | 第33-35页 |
| 1.2 改造前、后SMAP-29基因序列的合成 | 第35-36页 |
| 1.2.1 抗菌肽氨基酸序列的反翻译结果 | 第35页 |
| 1.2.2 抗菌肽DNA序列的限制性内切酶位点设计结果 | 第35页 |
| 1.2.3 目的基因的检测结果 | 第35-36页 |
| 1.3 重组克隆载体的构建 | 第36-46页 |
| 1.3.1 DH5 α菌株的培养结果 | 第36-37页 |
| 1.3.2 质粒pET-30 α(+)的单酶切结果 | 第37页 |
| 1.3.3 重组克隆质粒的双酶切鉴定结果 | 第37-39页 |
| 1.3.4 重组克隆质粒的PCR鉴定结果 | 第39-40页 |
| 1.3.5 重组质粒测序结果 | 第40-44页 |
| 1.3.6 重组表达质粒的双酶切鉴定结果 | 第44-45页 |
| 1.3.7 重组表达质粒的PCR鉴定结果 | 第45-46页 |
| 1.4 重组质粒的诱导表达及其产物的SDS-PAGE鉴定结果 | 第46-47页 |
| 1.5 羊源抗菌肽的分离及纯化结果 | 第47页 |
| 1.6 改造前、后抗菌肽抗菌活性鉴定结果 | 第47-48页 |
| 1.7 改造前、后抗菌肽溶血活性鉴定结果 | 第48页 |
| 2 讨论 | 第48-52页 |
| 2.1 质粒酶切位点的选择 | 第48页 |
| 2.2 质粒pET-30 α(+)与外源DNA的连接 | 第48-49页 |
| 2.3 感受态细胞的转化 | 第49页 |
| 2.4 IPTG诱导的浓度及时间 | 第49-50页 |
| 2.5 目的化的分离及纯化 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
