| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 植酸酶简介 | 第11-14页 |
| 1.1.1 磷的生理功能 | 第11页 |
| 1.1.2 植酸的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 植酸的抗营养特征 | 第12-14页 |
| 1.2 植酸酶的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 植酸酶的特性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植酸酶的作用机制及降解植酸的途径 | 第15-16页 |
| 1.2.3 植酸酶的分子结构 | 第16-17页 |
| 1.2.4 植酸酶的种类 | 第17页 |
| 1.2.5 植酸酶基因工程 | 第17-19页 |
| 1.2.6 植酸酶应用和研究方向 | 第19-20页 |
| 1.2.7 植酸酶研究展望 | 第20页 |
| 1.3 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第20-24页 |
| 1.3.1 微生物表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3.2 毕赤酵母的特性 | 第21页 |
| 1.3.3 毕赤酵母系统的组成 | 第21-23页 |
| 1.3.4 阻碍外源蛋白异源表达的因素 | 第23-24页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第25-26页 |
| 1.6 实验研究方案 | 第26-27页 |
| 第二章 YkAPPAS基因的设计、合成与测序 | 第27-43页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第27-30页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.2.1 重组植酸酶YkAPPAS密码子的优化、引物的设计 | 第30-31页 |
| 2.2.2 PCR扩增步骤及体系 | 第31-35页 |
| 2.2.3 重组植酸酶基因YkAPPAS的片段回收 | 第35-36页 |
| 2.3 重组植酸酶基因YkAPPAS片段的克隆与分析 | 第36-39页 |
| 2.3.1 大肠杆菌克隆载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态EG60的制备 | 第37页 |
| 2.3.3 热击转化 | 第37-38页 |
| 2.3.4 质粒的抽提 | 第38页 |
| 2.3.5 重组质粒酶切鉴定 | 第38页 |
| 2.3.6 重组植酸酶基因的序列测 | 第38-39页 |
| 2.4 结果与分析 | 第39-41页 |
| 2.4.1 重组植酸酶基因的合成 | 第39页 |
| 2.4.2 YkAPPAS基因序列的对比 | 第39-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 重组植酸酶基因YkAPPAS的异源表达 | 第43-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-47页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 生化试剂和主要仪器 | 第43页 |
| 3.1.3 培养基及其他溶液 | 第43-46页 |
| 3.1.4 毕赤酵母电击转化及发酵诱导所需溶液 | 第46页 |
| 3.1.5 SDS-PAGE电泳所需溶液 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-55页 |
| 3.2.1 重组植酸酶基因表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.2.2 重组质粒与毕赤酵母GS115电击转化 | 第48-51页 |
| 3.2.3 重组植酸酶的分离纯化及产物鉴定 | 第51-54页 |
| 3.2.4 重组植酸酶蛋白含量测定及比活测定 | 第54页 |
| 3.2.5 重组植酸酶YkAPPAS的脱糖基化 | 第54-55页 |
| 3.3 实验结果 | 第55-59页 |
| 3.3.1 表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.3.2 YkAPPAS基因的合成 | 第56页 |
| 3.3.3 重组植酸酶基因YkAPPAS转化、异源表达及扩大培养 | 第56-57页 |
| 3.3.4 BSA标准曲线 | 第57-58页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE及去糖基化 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 重组植酸酶YkAPPAS的酶学特性的研究 | 第60-70页 |
| 4.1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 4.1.1 生化试剂及主要仪器 | 第60页 |
| 4.1.2 溶液配制 | 第60-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 无机磷标准曲线 | 第62页 |
| 4.2.2 YkAPPAS的酶反应动力学参数的测定 | 第62页 |
| 4.2.3 重组植酸酶的最值pH及pH稳定性的测量 | 第62-63页 |
| 4.2.4 YkAPPAS的最适温度及温度稳定性的测定 | 第63页 |
| 4.2.5 多种金属离子及部分化合物对重组植酸酶酶学活性的作用 | 第63-64页 |
| 4.2.6 胃蛋白酶、胰蛋白酶对重组植酸酶YkAPPAS的影响 | 第64页 |
| 4.3 结果分析 | 第64-68页 |
| 4.3.1 重组植酸酶YkAPPAS的酶促反应动力学参数 | 第64-65页 |
| 4.3.2 重组植酸酶的最值pH及pH稳定性 | 第65-66页 |
| 4.3.3 YkAPPAS的最适温度及温度稳定性 | 第66-67页 |
| 4.3.4 多种金属离子及部分化合物对重组植酸酶YkAPPAS的作用 | 第67-68页 |
| 4.3.5 重组植酸酶YkAPPAS对两种蛋白酶耐受力的测定 | 第68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 总结与创新点 | 第70-72页 |
| 5.1 本文主要结论 | 第70页 |
| 5.2 本文主要创新点 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
