| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 第一章 雄性生殖干细胞及自噬研究进展 | 第12-22页 |
| 1.1 雄性生殖干细胞研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 睾丸结构及精子发生过程 | 第12-14页 |
| 1.1.2 影响雄性生殖干细胞自我更新的生长因子 | 第14-15页 |
| 1.1.3 影响雄性生殖干细胞的转录因子 | 第15-17页 |
| 1.2 自噬研究进展 | 第17-21页 |
| 1.2.1 自噬的发现 | 第17-18页 |
| 1.2.2 自噬的过程及信号通路 | 第18-21页 |
| 1.2.3 自噬在雄性生殖方面的研究 | 第21页 |
| 1.3 小结与展望 | 第21-22页 |
| 试验研究 | 第22-44页 |
| 第二章 GmGSCS-I-SB-EGFP-LC3B细胞系的建立及验证 | 第22-34页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 主要溶液的配制 | 第24-25页 |
| 2.2.2 无血清饥饿 | 第25页 |
| 2.2.3 细胞免疫荧光染色 | 第25页 |
| 2.2.4 pTRIP-CAGG-EGFP-LCB-puro载体构建 | 第25页 |
| 2.2.5 病毒包装及病毒感染后检测 | 第25-26页 |
| 2.2.6 GmGSCs-I-SB-EGFP-LC3B稳转细胞系筛选 | 第26页 |
| 2.2.7 流式计数 | 第26页 |
| 2.2.8 基因组提取 | 第26页 |
| 2.2.9 基因组PCR检测 | 第26-27页 |
| 2.2.10 Western Blotting检测 | 第27页 |
| 2.2.11 自噬体透射电镜观察 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-32页 |
| 2.3.1 GmGSCs-I-SB饥饿中的自噬现象 | 第28页 |
| 2.3.2 pTRIP-CAGG-EGFP-LC3B-puro慢病毒载体构建 | 第28-29页 |
| 2.3.3 GmGSCs-I-SB-EGFP-LC3B稳转细胞系的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 GmGSCs-I-SB-EGFP-LC3B自噬示踪能力和精原细胞特征检验 | 第30-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 自噬与雄性生殖干细胞维持及分化的关系 | 第34-44页 |
| 3.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器与耗材 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 主要溶液配制 | 第34-35页 |
| 3.2.2 不同浓度雷帕霉素和氯喹处理GmGSCs-I-SB | 第35页 |
| 3.2.3 CCK-8 检测细胞活力 | 第35页 |
| 3.2.4 雷帕霉素和氯喹组合处理细胞 | 第35页 |
| 3.2.5 细胞周期检测 | 第35-36页 |
| 3.2.6 早凋亡检测 | 第36页 |
| 3.2.7 Trizol法提取细胞总RNA | 第36页 |
| 3.2.8 实时定量PCR检测 | 第36-37页 |
| 3.2.9 类胚体生成及向三胚层分化检测 | 第37页 |
| 3.2.10 定向神经细胞定向诱导分化 | 第37页 |
| 3.3 结果 | 第37-42页 |
| 3.3.1 雷帕霉素和氯喹对GmGSCs-I-SB细胞活力的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.2 自噬对雄性生殖干细胞维持的影响 | 第38-40页 |
| 3.3.3 GmGSCs-I-SB-EGFP-LC3B自发分化中的自噬发生情况 | 第40-41页 |
| 3.3.4 GmGSCs-I-SB-EGFP-LC3B向神经诱导分化中的自噬 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44页 |
| 本文研究的创新点及进一步研究的课题 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
