| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 1,2,4-丁三醇 | 第11-12页 |
| 1.1.1 1,2,4-丁三醇概述 | 第11页 |
| 1.1.2 1,2,4-丁三醇的工业用途 | 第11-12页 |
| 1.2 1,2,4-丁三醇的工业化生产 | 第12页 |
| 1.3 生物法合成1,2,4-丁三醇的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.3.1 双菌株利用D-木糖或L-阿拉伯糖合成1,2,4-丁三醇的途径的构建 | 第12-14页 |
| 1.3.2 新型D-木糖脱氢酶的发现 | 第14-15页 |
| 1.3.3 E.coli利用D-木糖合成1,2,4-丁三醇的途径的构建 | 第15页 |
| 1.3.4 利用葡萄糖生物合成1,2,4-丁三醇的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 代谢工程与合成生物学 | 第16-19页 |
| 1.4.1 代谢工程 | 第16-17页 |
| 1.4.2 合成生物学 | 第17-18页 |
| 1.4.3 无细胞合成生物学和无细胞体系 | 第18页 |
| 1.4.4 无细胞体系的应用 | 第18-19页 |
| 1.5 已有的研究基础 | 第19-20页 |
| 1.6 本论文研究的目的、内容和意义 | 第20-23页 |
| 第二章 1,2,4-丁三醇生物合成菌株的构建和优化 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 培养基 | 第24页 |
| 2.1.3 酶和生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 引物 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-34页 |
| 2.2.1 表达载体的构建 | 第25-32页 |
| 2.2.2 重组菌株的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.3 摇瓶发酵 | 第33-34页 |
| 2.2.4 1,2,4-丁三醇的检测 | 第34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2.3.1 BW-011的1,2,4-丁三醇产量 | 第34页 |
| 2.3.2 依次提高MDLC的表达量,比较工程菌株的1,2,4-丁三醇产量 | 第34-36页 |
| 2.3.3 调节除MDLC外其余三步酶的表达量,优化菌株BW-016的1,2,4-丁三醇生产 | 第36-38页 |
| 2.3.4 YJHG和MDLC表达量的协同调节 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 新脱羧酶的发掘及其在1,2,4-丁三醇重组菌株的应用 | 第41-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 新的2-酮酸脱羧酶的筛选 | 第41-42页 |
| 3.2.2 新脱羧酶的质粒构建 | 第42页 |
| 3.2.3 新脱羧酶重组菌株构建 | 第42-43页 |
| 3.2.4 新脱羧酶重组菌株的优化 | 第43-44页 |
| 3.2.5 摇瓶发酵与1,2,4-丁三醇产量的检测 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-49页 |
| 3.3.1 新2-酮酸脱羧酶的筛选 | 第45-46页 |
| 3.3.2 表达不同2-酮酸脱羧酶的重组菌株的评价 | 第46-47页 |
| 3.3.3 依次提高KIVD的表达量,比较重组菌株1,2,4-丁三醇的产量 | 第47-48页 |
| 3.3.4 组合调节后三步酶的表达量,比较重组菌株的1,2,4-丁三醇产量 | 第48-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-51页 |
| 第四章 酶蛋白的表达与纯化 | 第51-67页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 缓冲液 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-56页 |
| 4.2.1 1,2,4-丁三醇合成途径中所有酶基因的克隆 | 第52-53页 |
| 4.2.2 酶蛋白表达菌株的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.3 酶蛋白诱导表达 | 第54页 |
| 4.2.4 酶蛋白纯化条件探索 | 第54-55页 |
| 4.2.5 酶蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 4.2.6 C端加His标签的XDH的酶活测定 | 第56页 |
| 4.2.7 C端加His标签的ADHP酶活测定 | 第56页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第56-65页 |
| 4.3.1 酶蛋白表达菌株的构建 | 第56-58页 |
| 4.3.2 酶蛋白的诱导表达 | 第58-59页 |
| 4.3.3 酶蛋白纯化条件的优化 | 第59-61页 |
| 4.3.4 酶蛋白的纯化 | 第61页 |
| 4.3.5 C端加His标签的XDH的比酶活测定以及丁三醇重组菌株中XDH的比酶活 | 第61-64页 |
| 4.3.6 C端加His标签的ADHP的比酶活 | 第64-65页 |
| 4.4 本章总结 | 第65-67页 |
| 第五章 全文总结与课题展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 | 第75-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第87页 |
