| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词简表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-37页 |
| 1.1 引言 | 第16-17页 |
| 1.2 β-TCP多孔修复体的制备 | 第17-20页 |
| 1.2.1 β-TCP粉体 | 第17页 |
| 1.2.2 β-TCP多孔修复体的制备 | 第17-20页 |
| 1.3 骨修复多孔修复体的功能化 | 第20-29页 |
| 1.3.1 成骨功能化 | 第20-21页 |
| 1.3.2 成血管功能化 | 第21-23页 |
| 1.3.3 抗菌功能化 | 第23-24页 |
| 1.3.4 其他功能化 | 第24页 |
| 1.3.5 骨修复多孔修复体功能化的方法 | 第24-29页 |
| 1.4 转基因修饰骨组织工程修复体 | 第29-33页 |
| 1.4.1 体内基因转染 | 第30-31页 |
| 1.4.2 体外基因转染 | 第31页 |
| 1.4.3 转基因载体 | 第31-33页 |
| 1.5 本论文研究目的、意义及主要研究内容 | 第33-37页 |
| 第二章 3D打印β-TCP多孔修复体制备及其生物安全性研究 | 第37-56页 |
| 2.1 引言 | 第37-38页 |
| 2.2 材料与方法 | 第38-43页 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 2.2.2 β-TCP粉体的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.3 β-TCP多孔修复体的制备 | 第40页 |
| 2.2.4 mBMSCs培养与接种 | 第40页 |
| 2.2.5 CCK-8细胞增殖检测 | 第40-41页 |
| 2.2.6 LSCM细胞粘附检测 | 第41页 |
| 2.2.7 SD大鼠颅骨骨缺损模型 | 第41-42页 |
| 2.2.8 β-TCP多孔修复体mico CT重建 | 第42页 |
| 2.2.9 SD大鼠系统解剖 | 第42页 |
| 2.2.10 SD大鼠器官HE染色 | 第42-43页 |
| 2.3 结果 | 第43-51页 |
| 2.3.1 3D打印β-TCP多孔修复体的构建及表征 | 第43页 |
| 2.3.2 mBMSC在β-TCP多孔修复体上的粘附 | 第43-45页 |
| 2.3.3 mBMSC在β-TCP多孔修复体上的增殖 | 第45-46页 |
| 2.3.4 β-TCP多孔修复体植入体观察 | 第46页 |
| 2.3.5 β-TCP多孔修复体植入体micro CT三维重建 | 第46-48页 |
| 2.3.6 SD大鼠系统解剖组织学观察 | 第48-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-55页 |
| 2.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第三章Ⅰ型胶原纳米纤维复合β-TCP多孔修复体的构建与研究 | 第56-79页 |
| 3.1 引言 | 第56-57页 |
| 3.2 材料与方法 | 第57-62页 |
| 3.2.1 实验试剂与仪器 | 第57-58页 |
| 3.2.2 Ⅰ型胶原纳米纤维复合β-TCP多孔修复体的制备 | 第58页 |
| 3.2.3 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体micro-CT表征 | 第58页 |
| 3.2.4 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体SEM表征 | 第58页 |
| 3.2.5 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体力学表征 | 第58-59页 |
| 3.2.6 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体原子吸收光谱表征 | 第59页 |
| 3.2.7 mBMSCs培养与种植 | 第59页 |
| 3.2.8 LSCM细胞粘附检测 | 第59页 |
| 3.2.9 CCK-8细胞增殖检测 | 第59页 |
| 3.2.10 碱性磷酸酶（ALP）染色与定量检测 | 第59-60页 |
| 3.2.11 RT-PCR成骨分化检测 | 第60-62页 |
| 3.2.12 TEM细胞基质小泡（MVs）检测 | 第62页 |
| 3.3 结果 | 第62-72页 |
| 3.3.1 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体孔隙结构与表面形貌 | 第62-63页 |
| 3.3.2 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体的Ca~(2+)离子释放 | 第63-64页 |
| 3.3.3 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体的机械强度 | 第64-65页 |
| 3.3.4 mBMSCs在Ⅰ型胶原纳米纤维修复体的粘附与增殖 | 第65-67页 |
| 3.3.5 mBMSCs在Ⅰ型胶原纳米纤维修复体的成骨分化 | 第67-69页 |
| 3.3.6 mBMSCs在Ⅰ型胶原纳米纤维修复体的生物矿化 | 第69-72页 |
| 3.3.7 Ⅰ型胶原纳米纤维修复体在mBMSCs作用下的表面矿化 | 第72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-77页 |
| 3.5 本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）复合β-TCP多孔修复体的构建与研究 | 第79-96页 |
| 4.1 引言 | 第79页 |
| 4.2 材料与方法 | 第79-84页 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器 | 第79-80页 |
| 4.2.2 CCK-8检测细胞的增殖 | 第80-81页 |
| 4.2.3 RT-PCR检测细胞的成骨分化 | 第81页 |
| 4.2.4 Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）复合β-TCP多孔修复体 | 第81页 |
| 4.2.5 SEM检测Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）修复体 | 第81-82页 |
| 4.2.6 液相色谱检测Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）修复体药物缓释 | 第82页 |
| 4.2.7 免疫荧光染色检测细胞粘附 | 第82页 |
| 4.2.8 SD大鼠皮下包埋 | 第82-83页 |
| 4.2.9 多孔修复体石蜡包埋脱钙切片 | 第83页 |
| 4.2.10 HE染色检测生物相容性 | 第83-84页 |
| 4.2.11 Masson染色检测Ⅰ型胶原生成 | 第84页 |
| 4.2.12 vWF免疫荧光染色检测血管生成 | 第84页 |
| 4.3 结果 | 第84-93页 |
| 4.3.1 PIGF对mBMSCs增殖的影响 | 第84-86页 |
| 4.3.2 PIGF对mBMSCs成骨分化的影响 | 第86-88页 |
| 4.3.3 Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）修复体的表面形貌 | 第88-89页 |
| 4.3.4 Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）修复体生长因子释放曲线 | 第89-90页 |
| 4.3.5 Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）修复体对mBMSCs成骨分化的影响 | 第90-92页 |
| 4.3.6 Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）修复体的生物相容性 | 第92页 |
| 4.3.7 Ⅰ型胶原纳米纤维负载生长因子（PIGF）修复体的生物活性 | 第92-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-95页 |
| 4.5 本章小结 | 第95-96页 |
| 第五章 转基因CHO细胞复合β-TCP多孔修复体的构建与研究（上）—稳定表达Tet-on PIGF与GCV/TK转基因CHO细胞系构建与筛选 | 第96-120页 |
| 5.1 引言 | 第96-97页 |
| 5.2 材料与方法 | 第97-108页 |
| 5.2.1 实验试剂与仪器 | 第97-99页 |
| 5.2.2 pLVX-Tet-On-Tight-PIGF-PGK-Puro载体构建 | 第99-103页 |
| 5.2.3 pIRES2-ZsGreen1-TK质粒的构建 | 第103-106页 |
| 5.2.4 质粒pLVX-Tet-On-Tight-myc-PIGF-PGK-Puro与质粒pIRES2-ZsGreen1-TK扩增 | 第106-107页 |
| 5.2.5 G418与嘌呤霉素对CHO细胞毒性筛选 | 第107页 |
| 5.2.6 质粒转染CHO细胞 | 第107-108页 |
| 5.2.7 DNA提取与鉴定 | 第108页 |
| 5.3 结果 | 第108-115页 |
| 5.3.1 pLVX-Tet-On-Tight-PIGF-PGK-Puro、pIRES2-ZsGreen1-TK质粒酶切鉴定 | 第108-109页 |
| 5.3.2 pLVX-Tet-On-Tight-PIGF-PGK-Puro、pIRES2-ZsGreen1-TK质粒测序结果 | 第109页 |
| 5.3.3 线性化质粒的浓度和纯度测定 | 第109页 |
| 5.3.4 G418与嘌呤霉素对CHO细胞毒性试验结果 | 第109-111页 |
| 5.3.5 CHO细胞转染效率 | 第111-112页 |
| 5.3.6 稳定转染pLVX-Tet-On-Tight-PIGF-PGK-Puro、pIRES2-ZsGreen1-TK CHO细胞抗性单克隆细胞的获得 | 第112-115页 |
| 5.4 讨论 | 第115-118页 |
| 5.5 本章小结 | 第118-120页 |
| 第六章 转基因CHO细胞复合β-TCP多孔修复体的构建与研究（下）—转基因CHO细胞复合多孔修复体 | 第120-141页 |
| 6.1 引言 | 第120-121页 |
| 6.2 材料与方法 | 第121-126页 |
| 6.2.1 实验试剂与仪器 | 第121-122页 |
| 6.2.2 相关试剂的配制 | 第122页 |
| 6.2.3 免疫荧光染色检测四环素（Tetracycline）诱导PIGF表达 | 第122页 |
| 6.2.4 细胞形态学检测GCV诱导细胞凋亡 | 第122-123页 |
| 6.2.5 流式细胞仪检测四环素（Tetracycline）诱导转基因复合修复体PIGF表达 | 第123页 |
| 6.2.6 WB检测四环素（Tetracycline）诱导转基因复合修复体PIGF表达 | 第123-124页 |
| 6.2.7 Elisa检测四环素（Tetracycline）诱导转基因复合修复体PIGF表达 | 第124页 |
| 6.2.8 活死（live/dead）染色检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第124页 |
| 6.2.9 SEM检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第124-125页 |
| 6.2.10 CCK-8检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第125页 |
| 6.2.11 流式细胞仪检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第125页 |
| 6.2.12 裸鼠皮下包埋模型 | 第125页 |
| 6.2.13 免疫荧光染色检测GCV诱导转基因修复体PIGF在体内的表达 | 第125-126页 |
| 6.3 结果 | 第126-137页 |
| 6.3.1 免疫荧光染色检测四环素诱导PIGF表达 | 第126页 |
| 6.3.2 形态学观察检测GCV诱导细胞凋亡 | 第126-129页 |
| 6.3.3 流式细胞仪检测四环素（Tetracycline）诱导转基因复合修复体PIGF表达 | 第129-131页 |
| 6.3.4 WB检测四环素（Tetracycline）诱导转基因复合修复体PIGF表达 | 第131-132页 |
| 6.3.5 Elisa检测四环素（Tetracycline）诱导转基因复合修复体PIGF表达 | 第132-133页 |
| 6.3.6 活死（live/dead）染色检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第133-135页 |
| 6.3.7 SEM检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第135页 |
| 6.3.8 CCK-8检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第135-136页 |
| 6.3.9 流式细胞仪检测GCV诱导转基因修复体细胞凋亡 | 第136-137页 |
| 6.4 讨论 | 第137-139页 |
| 6.5 本章小结 | 第139-141页 |
| 结论 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-164页 |
| 附录 1：pLVX-Tet-On-Tight-PIGF-myc-PGK-Puro载体质粒序列测序 | 第164-166页 |
| 附录 2：pIRES2-ZsGreen1载体质粒序列测序 | 第166-168页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第168-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 附表 | 第170页 |
