| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 甾体化合物 | 第9-11页 |
| 1.1.1 甾体化合物的概述 | 第9-10页 |
| 1.1.2 甾体化合物的应用 | 第10-11页 |
| 1.2 甾体化合物的生物转化 | 第11-14页 |
| 1.2.1 甾体化合物生物转化法的发展历程 | 第11-12页 |
| 1.2.2 甾体化合物生物转化的类型 | 第12-13页 |
| 1.2.3 甾体化合物生物转化的原料 | 第13-14页 |
| 1.3 甾体药物中间体 9α-OH-AD | 第14-17页 |
| 1.3.1 甾体药物中间体 9α-OH-AD的简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 甾体药物中间体 9α-OH-AD的合成方法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 微生物转化植物甾醇生产 9α-OH-AD的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.4 微生物生产 9α-OH-AD的关键酶 | 第17页 |
| 1.4 课题研究意义 | 第17-18页 |
| 1.5 课题研究的主要内容 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验试剂材料 | 第20页 |
| 2.1.4 菌株、质粒和引物 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 菌株的初筛 | 第21页 |
| 2.2.2 菌株的复筛 | 第21页 |
| 2.2.3 菌株的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.4 菌株的形态观察 | 第22页 |
| 2.2.5 菌株LY-1 的转化培养 | 第22页 |
| 2.2.6 菌株LY-1 转化产物的分离纯化及结构鉴定 | 第22页 |
| 2.2.7 菌株LY-1 转化特性的研究 | 第22-23页 |
| 2.2.8 菌株LY-1 基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.9 目的基因的扩增与回收 | 第23页 |
| 2.2.10 重组质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.11 感受态细胞的制备和转化 | 第24页 |
| 2.2.12 重组大肠杆菌的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.13 重组大肠杆菌中目的基因的表达 | 第25页 |
| 2.2.14 重组大肠杆菌SDS-PAGE检测 | 第25页 |
| 2.2.15 重组大肠杆菌Western Blot检测 | 第25页 |
| 2.2.16 分析方法 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-49页 |
| 3.1 菌株的筛选与鉴定 | 第27-34页 |
| 3.1.1 菌株的筛选 | 第27-28页 |
| 3.1.2 转化产物的检测 | 第28-29页 |
| 3.1.3 转化产物的结构鉴定 | 第29-31页 |
| 3.1.4 菌株的形态特征 | 第31-32页 |
| 3.1.5 菌株的鉴定 | 第32-34页 |
| 3.2 菌株LY-1 转化特性的探究 | 第34-37页 |
| 3.2.1 大豆油对菌株LY-1 转化植物甾醇的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.2 葡萄糖对菌株LY-1 转化植物甾醇的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.3 菌株LY-1 对甾体底物AD的转化研究 | 第36-37页 |
| 3.2.4 菌株LY-1 的转化特性分析 | 第37页 |
| 3.3 3-甾酮-9α-羟基化酶的外源表达 | 第37-43页 |
| 3.3.1 3-甾酮-9α-羟基化酶基因的扩增 | 第38-40页 |
| 3.3.2 大肠杆菌BL21外源表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.3 重组大肠杆菌BL21的蛋白表达 | 第41-42页 |
| 3.3.4 重组大肠杆菌BL21甾体转化活性分析 | 第42-43页 |
| 3.4 野生菌株LY-1 的分子改造 | 第43-49页 |
| 3.4.1 野生菌株LY-1 转化液状态的改进 | 第43-44页 |
| 3.4.2 外源添加物对感受态细胞转化效率的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 野生菌株LY-1 增强表达质粒的构建及验证 | 第45-46页 |
| 3.4.4 重组菌株对植物甾醇的的转化研究 | 第46-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49-50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58-59页 |
| 附录2：菌株LY-1 转化植物甾醇产物鉴定相关图谱 | 第59-68页 |
| 附录3：KshA和KshB的编码序列 | 第68-72页 |
| 附录4：重组菌E.coli BL21/pET28a(+)-KshAB转化产物LC-MS检测图谱 | 第72页 |
