| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 链霉菌简介 | 第9-11页 |
| 1.1.1 链霉菌及其基因组概述 | 第9-10页 |
| 1.1.2 链霉菌的应用价值 | 第10-11页 |
| 1.2 非昔罗霉素的介绍 | 第11-13页 |
| 1.2.1 非昔罗霉素的结构特点及生物活性 | 第11-12页 |
| 1.2.2 非昔罗霉素的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.3 非昔罗霉素的合成方式 | 第13-16页 |
| 1.3.1 非昔罗霉素的生物合成方式 | 第13-15页 |
| 1.3.2 非昔罗霉素的化学合成 | 第15-16页 |
| 1.4 结构相关的其它天然产物 | 第16-18页 |
| 1.5 本课题的立题依据及研究内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 本课题的立题依据 | 第18-19页 |
| 1.5.2 本课题的研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 质粒及特点 | 第20-21页 |
| 2.1.3 引物 | 第21-23页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5 实验设备与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.6 主要溶液与缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.7 培养基 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 菌种培养及保藏 | 第26-27页 |
| 2.2.2 细菌DNA的小量提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 DNA片段切胶回收 | 第28页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.5 PCR筛选S.ficellus NRRL8067基因文库 | 第29页 |
| 2.2.6 S.ficellus NRRL8067对两种抗生素的抗性考察 | 第29页 |
| 2.2.7 阻断nrps1的重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.8 其它重组质粒的构建 | 第31页 |
| 2.2.9 大肠杆菌ET12567与S.ficellus NRRL8067结合转移 | 第31-33页 |
| 2.2.10 双交换阻断株的筛选 | 第33页 |
| 2.2.11 回补菌株的构建 | 第33页 |
| 2.2.12 链霉菌的发酵培养 | 第33页 |
| 2.2.13 以草酸青霉菌为指示菌对发酵液中非昔罗霉素活性的检测 | 第33-34页 |
| 2.2.14 MS/MS和LC-MS检测发酵液 | 第34页 |
| 2.2.15 对非昔罗霉素的生物合成基因簇进行生物信息学分析 | 第34页 |
| 2.3 核苷酸序列登录号 | 第34-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-60页 |
| 3.1 对S.ficellus NRRL8067基因文库的筛选 | 第35-36页 |
| 3.1.1 PCR筛选含nrps基因序列的阳性克隆 | 第35页 |
| 3.1.2 测序结果的序列分析 | 第35-36页 |
| 3.2 非昔罗霉素生物合成基因簇的鉴定 | 第36-53页 |
| 3.2.1 S.ficellus NRRL8067对两种抗生素的抗性考察 | 第36页 |
| 3.2.2 nrps基因的阻断实验 | 第36-45页 |
| 3.2.3 S.ficellusNRRL8067及阻断菌株发酵产物中非昔罗霉素的检测 | 第45-47页 |
| 3.2.4 nrps1阻断菌株的回补实验 | 第47-48页 |
| 3.2.5 染色体步移法寻找nrps1两侧基因 | 第48-49页 |
| 3.2.6 非昔罗霉素生物合成基因簇的序列分析 | 第49-53页 |
| 3.3 非昔罗霉素生物合成基因簇中相关基因的功能分析 | 第53-56页 |
| 3.4 非昔罗霉素的生物合成途径的研究 | 第56-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 5 展望 | 第61-62页 |
| 6 参考文献 | 第62-68页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69页 |
