| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第19-31页 |
| 1.1 抗菌肽的生物学特征 | 第19-20页 |
| 1.1.1 抗菌肽来源 | 第19页 |
| 1.1.2 抗菌肽的理化性质和决定因素 | 第19-20页 |
| 1.1.3 抗菌肽的结构多样性 | 第20页 |
| 1.2 抗菌肽的作用机制 | 第20-25页 |
| 1.2.1 抗菌活性 | 第21-23页 |
| 1.2.2 抗病毒活性 | 第23-24页 |
| 1.2.3 抗真菌活性 | 第24页 |
| 1.2.4 抗寄生虫活性 | 第24-25页 |
| 1.2.5 免疫调节及进一步活动 | 第25页 |
| 1.3 抗菌肽的临床应用及前景 | 第25-28页 |
| 1.3.1 作为抗菌消炎药的临床应用 | 第26-27页 |
| 1.3.2 抗肿瘤药物 | 第27-28页 |
| 1.3.3 免疫调节 | 第28页 |
| 1.4 药物载体 | 第28-29页 |
| 1.5 面临的问题 | 第29-30页 |
| 1.5.1 抗菌肽产品的来源问题 | 第29页 |
| 1.5.2 抗菌肽的活性问题 | 第29-30页 |
| 1.5.3 抗菌肽的毒性问题 | 第30页 |
| 1.5.4 抗菌肽的体内稳定性问题 | 第30页 |
| 1.5.5 抗菌肽的耐药性问题 | 第30页 |
| 1.6 展望 | 第30-31页 |
| 第二章 杂合抗菌肽的分子设计及结构预测 | 第31-41页 |
| 2.1 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.1.1 抗菌肽母本选择 | 第31-32页 |
| 2.1.2 杂合原理 | 第32页 |
| 2.1.3 生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2.2 结果与分析 | 第33-39页 |
| 2.2.1 抗菌肽序列 | 第33页 |
| 2.2.2 抗菌肽的理化性质分析 | 第33-34页 |
| 2.2.3 二级结构分析 | 第34-36页 |
| 2.2.4 跨膜预测 | 第36-37页 |
| 2.2.5 抗菌肽两亲性分析 | 第37-39页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 人源及杂合抗菌肽基因的合成 | 第41-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验菌种与质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 实验主要仪器 | 第41页 |
| 3.1.3 实验主要试剂及试剂盒 | 第41-42页 |
| 3.1.4 培养基及其配制 | 第42页 |
| 3.1.5 其它试剂及其配制 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第42-44页 |
| 3.2.2 基因合成 | 第44页 |
| 3.2.3 2%琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 3.2.4 目的基因的回收与纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.5 目的基因克隆连接 | 第46-47页 |
| 3.2.6 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第47页 |
| 3.2.7 转化大肠杆菌 | 第47页 |
| 3.2.8 重组菌质粒提取 | 第47-48页 |
| 3.2.9 阳性克隆子双酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.10 基因测序鉴定 | 第49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.3.1 全长基因合成 | 第49页 |
| 3.3.2 重组子双酶切验证 | 第49-51页 |
| 3.3.3 目的基因测序验证 | 第51-52页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 抗菌肽在乳酸乳球菌中的分泌表达及作用 | 第54-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第56-59页 |
| 4.1.1 实验菌种与质粒 | 第56页 |
| 4.1.2 实验主要仪器 | 第56页 |
| 4.1.3 实验试剂及试剂盒 | 第56页 |
| 4.1.4 培养基及其配制 | 第56-57页 |
| 4.1.5 主要试剂及其配制 | 第57-59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-66页 |
| 4.2.1 目的抗菌肽基因提取 | 第59页 |
| 4.2.2 乳酸菌质粒DNA提取 | 第59页 |
| 4.2.3 重组大肠杆菌mc1061的构建 | 第59-60页 |
| 4.2.4 重组大肠杆菌mc1061的鉴定 | 第60页 |
| 4.2.5 乳酸菌感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
| 4.2.6 乳酸菌感受态细胞的电击转化 | 第61页 |
| 4.2.7 转化子的筛选 | 第61页 |
| 4.2.8 转化子的酶切及测序 | 第61-62页 |
| 4.2.9 重组乳酸菌的诱导表达及提取 | 第62页 |
| 4.2.10 上清表达产物的纯化 | 第62页 |
| 4.2.11 重组蛋白的电泳鉴定——Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第62-64页 |
| 4.2.12 重组蛋白免疫检测——Western Blot和Dot Blot | 第64-66页 |
| 4.2.13 上清表达产物抑菌活性检测 | 第66页 |
| 4.3 结果与分析 | 第66-73页 |
| 4.3.1 重组乳酸菌菌液PCR鉴定 | 第66-67页 |
| 4.3.2 重组乳酸菌双酶切鉴定 | 第67-68页 |
| 4.3.3 重组乳酸菌测序鉴定 | 第68-69页 |
| 4.3.4 蛋白凝胶电泳分析 | 第69-70页 |
| 4.3.5 蛋白免疫检测分析 | 第70-71页 |
| 4.3.6 抑菌实验 | 第71-73页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第73-76页 |
| 第五章 结论与展望 | 第76-78页 |
| 5.1 结论 | 第76页 |
| 5.2 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 在读期间已经发表和将要发表的论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |