| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-16页 |
| 1. 引言 | 第16-33页 |
| 1.1 先天免疫与炎症反应 | 第16-18页 |
| 1.1.1 先天免疫 | 第16-17页 |
| 1.1.2 模式识别受体PRRs | 第17-18页 |
| 1.1.3 促炎症细胞因子与炎症反应 | 第18页 |
| 1.2 MAPK信号通路 | 第18-20页 |
| 1.3 ERK1/2信号通路 | 第20-22页 |
| 1.4 Tpl2的基本情况 | 第22-26页 |
| 1.4.1 Tpl2的发现与表达 | 第22-23页 |
| 1.4.2 对Tpl2功能的负调控 | 第23-24页 |
| 1.4.3 Tpl2的激活与磷酸化 | 第24-25页 |
| 1.4.4 Tpl2参与调控的信号通路 | 第25-26页 |
| 1.5 Tpl2-MEK1/2-ERK1/2信号通路的激活 | 第26-28页 |
| 1.6 Tpl2是潜在的抗炎药物作用靶点 | 第28-32页 |
| 1.6.1 Tpl2与先天免疫和炎症反应 | 第28-30页 |
| 1.6.2 Tpl2与癌症 | 第30-31页 |
| 1.6.3 Tpl2作为药物靶点的优势 | 第31页 |
| 1.6.4 目前已知的Tpl2小分子抑制剂 | 第31-32页 |
| 1.7 本论文的研究重点 | 第32-33页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第33-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第33页 |
| 2.1.2 主要试剂与抗体 | 第33-35页 |
| 2.1.3 载体与菌株 | 第35-36页 |
| 2.1.4 实验仪器与耗材 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-47页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第36-37页 |
| 2.2.2 细胞复苏与冻存 | 第37-38页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.2.4 构建稳定表达细胞系 | 第39页 |
| 2.2.5 免疫印迹(Western blotting) | 第39-40页 |
| 2.2.6 蛋白的表达和纯化 | 第40-42页 |
| 2.2.7 从A549和U937细胞中提取细胞裂解液S20、S100 | 第42-43页 |
| 2.2.8 依赖于TRAF6激活的Tpl2-MEK1/2-ERK1/2体外反应 | 第43页 |
| 2.2.9 免疫去除Uev1a、TAK1、IKK实验(immuno-depletion) | 第43-44页 |
| 2.2.10 免疫沉淀IP | 第44页 |
| 2.2.11 验证TRAF6激活Tpl2体外系统中必要因子的去除与回补实验 | 第44页 |
| 2.2.12 IKK对于TRAF6体外激活Tpl2必要性的验证实验 | 第44-45页 |
| 2.2.13 利用TRAF6激活Tpl2体外系统的小分子药物筛选 | 第45页 |
| 2.2.14 Tpl2磷酸化MEK1的体外激酶实验 | 第45页 |
| 2.2.15 利用Tpl2激酶实验反应的小分子药物筛选 | 第45-46页 |
| 2.2.16 统计学处理 | 第46-47页 |
| 3. 实验结果 | 第47-67页 |
| 3.1 炎症信号通路的激活引起经典MAPK信号通路的激活 | 第47-49页 |
| 3.2 TNFR/ILlR/TLR介导激活的MEK1/2-ERK1/2通路依赖于Tpl2 | 第49-50页 |
| 3.3 构建依赖于TRAF6激活的Tpl2-MEK1/2-ERK1/2体外反应系统 | 第50-52页 |
| 3.4 Tpl2的体外激活依赖于多泛素化与Ubc13/Uev1a | 第52-54页 |
| 3.5 TAK1的酶活是Tpl2激活所必需的 | 第54-56页 |
| 3.6 IKK的酶活是Tpl2激活所必需的 | 第56-59页 |
| 3.7 Tpl2的小分子抑制剂初步筛选 | 第59-67页 |
| 3.7.1 小分子药物库的初步筛选 | 第59-62页 |
| 3.7.2 Tpl2的潜在小分子抑制剂筛选 | 第62-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 Tpl2-MEK1/2-ERK1/2信号通路激活的必需因子 | 第67-69页 |
| 4.2 初步筛选出的Tpl2小分子抑制剂 | 第69页 |
| 4.3 个人思考 | 第69-71页 |
| 5. 小结 | 第71-72页 |
| 5.1 本文特色与创新点 | 第71页 |
| 5.2 需要进一步研究的内容 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80-87页 |
| 1 主要溶液配制 | 第80-86页 |
| 2 siRNA和gRNA序列 | 第86-87页 |
| 作者简介 | 第87页 |
