| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第13-18页 |
| 0.1 小胶质细胞(MG) | 第13-15页 |
| 0.1.1 MG的形态与功能 | 第13-14页 |
| 0.1.2 小胶质细胞的激活 | 第14页 |
| 0.1.3 小胶质细胞在AD脑内的作用 | 第14-15页 |
| 0.2 硒及硒蛋白的功能 | 第15-16页 |
| 0.2.1 亚硒酸钠 | 第15页 |
| 0.2.2 硒蛋白与AD的关系 | 第15-16页 |
| 0.3 研究方向 | 第16-18页 |
| 第1章 硒蛋白mSel K的过表达及敲减对小鼠小胶质细胞吞噬和迁移能力的影响 | 第18-36页 |
| 1.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 1.1.1 实验用细胞和病毒 | 第18-19页 |
| 1.1.2 实验用药品与试剂 | 第19页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第19-20页 |
| 1.2 实验方法 | 第20-26页 |
| 1.2.1 BV-2 细胞的培养 | 第20-21页 |
| 1.2.2 AD293细胞的培养 | 第21-22页 |
| 1.2.3 腺病毒过表达载体p HBAd-mSelK和pHBAd-mSelK-RNAi的扩增 | 第22-23页 |
| 1.2.4 细胞存活率的测定--MTT法检测 | 第23页 |
| 1.2.5 亚硝酸盐含量的测定--Griess法检测 | 第23-24页 |
| 1.2.6 Transwell法检测静息态小胶质细胞的迁移能力 | 第24页 |
| 1.2.7 划痕实验检测静息态和激活态小胶质细胞迁移能力的影响 | 第24-25页 |
| 1.2.8 吞噬能力的测定 | 第25页 |
| 1.2.9 统计学方法 | 第25-26页 |
| 1.3 实验结果 | 第26-34页 |
| 1.3.1 硒蛋白mSelK过表达及敲减对静息态和激活态BV-2 细胞存活率的影响 | 第26-28页 |
| 1.3.2 硒蛋白mSelK的过表达及敲减对静息态和激活态BV-2 细胞NO释放的影响 | 第28-29页 |
| 1.3.3 硒蛋白mSelK过表达及敲减对静息态和LPS激活BV2细胞的迁移能力的影响 | 第29-32页 |
| 1.3.4 硒蛋白mSelK过表达及敲减对静息态和LPS激活BV2细胞BV2细胞的吞噬能力的影响 | 第32-34页 |
| 1.4 分析与讨论 | 第34-35页 |
| 1.5 小结 | 第35-36页 |
| 第2章 硒蛋白mSel K的过表达及敲减影响小胶质细胞迁移和吞噬能力的机制分析 | 第36-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 2.1.1 实验用细胞和病毒 | 第36-37页 |
| 2.1.2 实验用药品与试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-49页 |
| 2.2.1 BV-2 细胞的培养 | 第38-39页 |
| 2.2.2 AD293细胞的培养 | 第39页 |
| 2.2.3 流式细胞仪检测胞浆游离钙 | 第39页 |
| 2.2.4 实时定量PCR法考察硒蛋白mSelK过表达和敲减小胶质细胞内IP3R的mRNA基因表达的影响 | 第39-42页 |
| 2.2.5 Western Blot法考察硒蛋白mSelK过表达和敲减小胶质细胞中IP3R蛋白表达的影响 | 第42-48页 |
| 2.2.5.1 BV-2 细胞总蛋白提取 | 第43页 |
| 2.2.5.2 标准曲线的绘制及BV-2 细胞蛋白的浓度的测定 | 第43页 |
| 2.2.5.3 蛋白变性 | 第43-44页 |
| 2.2.5.4 工作液的配制 | 第44-47页 |
| 2.2.5.5 SDS－PAGE电泳 | 第47页 |
| 2.2.5.6 转膜 | 第47-48页 |
| 2.2.5.7 免疫反应及ECL发光仪测定 | 第48页 |
| 2.2.6 亚硝酸盐含量的测定--Griess法检测 | 第48-49页 |
| 2.3 实验结果 | 第49-55页 |
| 2.3.1 硒蛋白mSelK过表达及敲减对静息态和LPS激活BV-2 细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度的影响 | 第49-51页 |
| 2.3.2 实时定量PCR法考察mSel K过表达及敲减细胞内IP3R mRNA基因表达的影响 | 第51-52页 |
| 2.3.3 Western Blot法考察m SelK过表达及敲减对小胶质细胞中IP3R蛋白表达的影响 | 第52-53页 |
| 2.3.4 硒蛋白mSel K的过表达及敲减对静息态和激活态BV-2 细胞NO释放的影响 | 第53-55页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第55-56页 |
| 2.5 小结 | 第56-57页 |
| 第3章 硒的添加对小胶质细胞中硒蛋白mSelK表达量及游离钙离子浓度的影响研究 | 第57-67页 |
| 3.1 实验材料 | 第57-59页 |
| 3.1.1 实验用细胞 | 第57页 |
| 3.1.2 实验用药品与试剂 | 第57-58页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第58-59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 3.2.1 BV-2 细胞的培养 | 第59页 |
| 3.2.2 亚硒酸钠对BV-2 细胞存活率及静息态BV-2 细胞基础NO释放的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.2.1 亚硒酸钠的配制 | 第59-60页 |
| 3.2.2.2 细胞存活率的测定--MTT法检测 | 第60页 |
| 3.2.2.3 亚硝酸盐含量的测定--Griess法检测 | 第60页 |
| 3.2.3 流式细胞仪检测胞浆游离钙 | 第60-61页 |
| 3.2.4 实时定量PCR法考察亚硒酸钠在细胞内mSelK的mRNA基因的表达情况 | 第61页 |
| 3.2.5 Western Blot法考察亚硒酸钠作用与小胶质细胞中硒蛋白mSelK的表达的情况 | 第61-62页 |
| 3.3 实验结果 | 第62-65页 |
| 3.3.1 硒对小胶质细胞活化的作用 | 第62-63页 |
| 3.3.2 亚硒酸钠对小胶质细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度的影响 | 第63页 |
| 3.3.3 实时定量PCR法考察亚硒酸钠作用与小胶质细胞后mSelK的mRNA表达情况 | 第63-64页 |
| 3.3.4 Western Blot验证亚硒酸钠作用于小鼠小胶质细胞后硒蛋白mSelK的表达情况 | 第64-65页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第65页 |
| 3.5 小结 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第74-75页 |
