| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第17-63页 |
| 1.1 蛋白质的糖基化 | 第17-31页 |
| 1.1.1 蛋白质糖基化的生物学意义 | 第17-18页 |
| 1.1.2 糖蛋白糖肽的分离方法 | 第18-26页 |
| 1.1.3 蛋白质糖基化的鉴定方法和分析策略 | 第26-31页 |
| 1.2 亲和色谱 | 第31-37页 |
| 1.2.1 亲和色谱的原理 | 第31-32页 |
| 1.2.2 亲和色谱的研究内容和基本理论 | 第32-35页 |
| 1.2.3 影响亲和色谱分离的因素 | 第35-37页 |
| 1.3 亲和固定相 | 第37-53页 |
| 1.3.1 亲和色谱的组成 | 第37-38页 |
| 1.3.2 亲和色谱的分类 | 第38-43页 |
| 1.3.3 亲和固定相的制备方法 | 第43-53页 |
| 1.4 亲和色谱方法在糖蛋白糖肽分离中的应用 | 第53-61页 |
| 1.4.1 凝集素亲和色谱在糖蛋白质组学中的应用 | 第53-56页 |
| 1.4.2 Protein A色谱柱分离纯化IgG | 第56-59页 |
| 1.4.3 嗜硫色谱和混合色谱纯化IgG | 第59-61页 |
| 1.5 本文的选题思路和研究内容 | 第61-63页 |
| 2 凝集素亲和色谱材料SG Con A富集糖蛋白/糖肽 | 第63-76页 |
| 2.1 引言 | 第63页 |
| 2.2 实验部分 | 第63-66页 |
| 2.2.1 仪器与试剂 | 第63-64页 |
| 2.2.2 液相色谱条件 | 第64页 |
| 2.2.3 制备SG Con A色谱材料和装柱 | 第64-65页 |
| 2.2.4 PNGase F去除N-连接聚糖和聚糖的富集 | 第65页 |
| 2.2.5 从OVA馏分中富集聚糖 | 第65页 |
| 2.2.6 用SG Con A和Agarose Con A富集RNase B糖肽 | 第65-66页 |
| 2.2.7 质谱条件 | 第66页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第66-75页 |
| 2.3.1 凝集素色谱柱的制备方法 | 第66-67页 |
| 2.3.2 亲和色谱柱的物理性质表征 | 第67-69页 |
| 2.3.3 凝集素亲和色谱富集糖蛋白的特异性评价 | 第69-75页 |
| 2.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 3 氧化葡聚糖辅助制备以硅胶为基质的Con A材料用于亲和富集糖蛋白/糖肽 | 第76-99页 |
| 3.1 引言 | 第76-77页 |
| 3.2 实验部分 | 第77-82页 |
| 3.2.1 仪器与试剂 | 第77页 |
| 3.2.2 液相色谱和质谱条件 | 第77-78页 |
| 3.2.3 材料表面配基浓度的计算和Zeta电势的测定 | 第78页 |
| 3.2.4 吸附实验 | 第78-79页 |
| 3.2.5 脱糖基化并富集蛋白质释放的聚糖 | 第79页 |
| 3.2.6 制备SiO_2-ODex Con A和SiO_2-Ald Con A材料,装填色谱柱 | 第79-81页 |
| 3.2.7 高效液相亲和色谱柱的评价 | 第81页 |
| 3.2.8 质谱实验条件 | 第81-82页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第82-98页 |
| 3.3.1 凝集素色谱柱的制备方法 | 第82-84页 |
| 3.3.2 亲和色谱材料SiO_2-ODex Con A和SiO_2-Ald Con A的物理性质表征 | 第84-86页 |
| 3.3.3 标准糖蛋白/糖肽评价两种凝集素Con A亲和色谱柱的特异性 | 第86-89页 |
| 3.3.4 应用两种Con A材料富集实际生物样品中的糖蛋白 | 第89-98页 |
| 3.4 本章小结 | 第98-99页 |
| 4 二乙烯基砜辅助合成以硅胶为基质的混合模式材料用于分离分析人免疫球蛋白IgG | 第99-124页 |
| 4.1 引言 | 第99-101页 |
| 4.2 实验部分 | 第101-106页 |
| 4.2.1 仪器与试剂 | 第101-102页 |
| 4.2.2 制备SiO_2-DVS材料和SiO_2-DVSM材料并装填色谱柱 | 第102-103页 |
| 4.2.3 吸附实验 | 第103页 |
| 4.2.4 纯化,酶解,脱糖基化,和IgG聚糖的富集 | 第103-104页 |
| 4.2.5 液相色谱实验 | 第104-105页 |
| 4.2.6 质谱实验条件 | 第105-106页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第106-123页 |
| 4.3.1 制备色谱材料SiO_2-DVS和SiO_2-DVSM | 第106-107页 |
| 4.3.2 色谱材料SiO_2-DVS和SiO_2-DVS-Mannose的表征 | 第107-109页 |
| 4.3.3 色谱评价SiO_2-DVS材料(10 nm)和SiO_2-DVSM材料(10 nm) | 第109-112页 |
| 4.3.4 色谱评价两种材料对蛋白质的分离作用 | 第112-117页 |
| 4.3.5 质谱表征 | 第117-123页 |
| 4.4 本章小结 | 第123-124页 |
| 5 无Cu催化的SPAAC反应制备Protein A亲和色谱柱及对IgG的分离应用 | 第124-140页 |
| 5.1 引言 | 第124页 |
| 5.2 实验部分 | 第124-135页 |
| 5.2.1 化学试剂 | 第124-125页 |
| 5.2.2 液相色谱和质谱条件 | 第125页 |
| 5.2.3 制备SiO_2-SPAAC Protein A材料和装填色谱柱 | 第125-133页 |
| 5.2.4 SiO_2-SPAAC Protein A材料表面吸附IgG | 第133页 |
| 5.2.5 SiO_2-SPAAC Protein A色谱柱的选择性评价 | 第133-134页 |
| 5.2.6 糖蛋白脱糖基化和富集蛋白质释放的聚糖 | 第134页 |
| 5.2.7 质谱实验条件 | 第134-135页 |
| 5.3 结果和讨论 | 第135-139页 |
| 5.3.1 制备SiO_2-SPAAC Protein A材料 | 第135页 |
| 5.3.2 SPAAC色谱材料的物理表征 | 第135-137页 |
| 5.3.3 SiO_2-SPAAC Protein A色谱柱选择性的评价 | 第137-138页 |
| 5.3.4 质谱表征蛋白质的糖基化信息 | 第138-139页 |
| 5.4 本章小结 | 第139-140页 |
| 6 结论与展望 | 第140-142页 |
| 6.1 结论 | 第140-141页 |
| 6.2 创新点 | 第141页 |
| 6.3 展望 | 第141-142页 |
| 参考文献 | 第142-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第160-161页 |
| 作者简介 | 第161页 |
