| 附件 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 主要符号表 | 第14-15页 |
| 第一部分 引言 | 第15-17页 |
| 第二部分 PCSK6沉默对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞生物学的影响 | 第17-30页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验动物 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| 2 研究方法 | 第18-22页 |
| ·CIA模型构建 | 第18页 |
| ·滑膜细胞原代培养 | 第18-19页 |
| ·滑膜细胞纯度鉴定 | 第19页 |
| ·细胞顺势转染 | 第19页 |
| ·细胞RNA提取 | 第19-20页 |
| ·采用RT-qPCR法检测干扰PCSK6抑制效率及PCSK6下游功能基因的表达 | 第20页 |
| ·采用MTT法检测细胞增殖能力 | 第20-21页 |
| ·采用流式细胞术检测细胞周期变化 | 第21页 |
| ·采用划痕法检测细胞迁移能力 | 第21页 |
| ·采用Transwell法检测细胞侵袭能力 | 第21-22页 |
| ·采用ELISA法检测细胞炎性因子的分泌水平 | 第22页 |
| ·统计学处理 | 第22页 |
| 3 实验结果 | 第22-27页 |
| ·大鼠后爪肿胀程度 | 第22-23页 |
| ·滑膜细胞形态观察及纯度鉴定 | 第23页 |
| ·siRNA特异性抑制对PCSK6基因的影响 | 第23-24页 |
| ·抑制PCSK6表达对滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响 | 第24-25页 |
| ·ELISA检测抑制PCSK6表达对细胞炎性因子的影响 | 第25-26页 |
| ·流式细胞术检测抑制PCSK6表达对滑膜细胞周期的影响 | 第26-27页 |
| ·PCSK6基因沉默对下游相关功能基因表达的影响 | 第27页 |
| 4 讨论 | 第27-30页 |
| 第三部分 PCSK6重组蛋白对类风湿关节炎滑膜细胞生物学的影响及分子机制研究 | 第30-54页 |
| 1 实验材料 | 第30-31页 |
| ·样本采集 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| 2 研究方法 | 第31-37页 |
| ·滑膜细胞原代培养 | 第31-32页 |
| ·滑膜细胞纯度鉴定 | 第32页 |
| ·PCSK6重组蛋白浓度梯度制备 | 第32页 |
| ·采用MTT法检测细胞增殖能力 | 第32页 |
| ·采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化 | 第32-33页 |
| ·采用划痕法检测细胞迁移能力 | 第33页 |
| ·采用Transwell法检测细胞侵袭能力 | 第33-34页 |
| ·采用ELISA法检测细胞炎性因子的分泌水平 | 第34页 |
| ·细胞RNA提取 | 第34页 |
| ·采用RT-qPCR法检测PCSK6下游功能基因的表达 | 第34-35页 |
| ·采用Western blot法检测PCSK6重组蛋白诱导后相关信号转导通路的变化 | 第35-36页 |
| ·抑制信号转导通路后PCSK6对滑膜细胞生物学行为的影响 | 第36-37页 |
| ·统计学处理 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-50页 |
| ·滑膜细胞形态观察及纯度鉴定 | 第37-38页 |
| ·PCSK6重组蛋白对滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响 | 第38-40页 |
| ·ELISA法检测PCSK6重组蛋白对滑膜细胞炎性因子分泌的影响 | 第40页 |
| ·RT-qPCR法检测PCSK6重组蛋白对下游相关功能基因表达的影响 | 第40-41页 |
| ·流式细胞术检测PCSK6重组蛋白对滑膜细胞周期和凋亡的影响 | 第41-43页 |
| ·Western blot法检测PCSK6重组蛋白对基质金属蛋白酶MMP9的影响 | 第43-44页 |
| ·PCSK6重组蛋白对ERK、STAT3、NF-κB p65等信号转导通路的影响 | 第44页 |
| ·ERK、STAT3、NF-κB p65信号通路抑制剂对滑膜细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响 | 第44-47页 |
| ·ELISA法检测ERK、STAT3、NF-κB p65信号通路抑制剂对细胞炎性因子分泌的影响 | 第47-48页 |
| ·流式细胞术检测ERK、STAT3、NF-κB p65信号通路抑制剂对滑膜细胞周期和凋亡的影响 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 综述 | 第60-71页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
