中文摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
1 前言 | 第13-22页 |
·铅的污染状况及毒性研究进展 | 第13-14页 |
·铅的理化性质 | 第13页 |
·铅的污染状况 | 第13-14页 |
·铅的肾毒性研究进展 | 第14页 |
·细胞凋亡研究进展 | 第14-17页 |
·死亡受体通路 | 第15页 |
·线粒体通路 | 第15-16页 |
·内质网通路 | 第16-17页 |
·钙离子信号与细胞凋亡 | 第17-22页 |
·胞内钙离子正常分布状况 | 第18页 |
·胞内钙稳态的维持 | 第18-20页 |
·钙稳态失衡与细胞凋亡 | 第20-22页 |
2 材料与方法 | 第22-37页 |
·实验动物 | 第22页 |
·主要试剂 | 第22-23页 |
·主要仪器 | 第23-24页 |
·实验所用溶液的配制 | 第24-27页 |
·磷酸盐缓冲液的配制 | 第24页 |
·含钙及无钙DMEM-F12细胞培养基的配制与除菌 | 第24-25页 |
·醋酸铅溶液的配制 | 第25页 |
·2-APB的配制 | 第25页 |
·BAPTA-AM的配制 | 第25页 |
·10 × Western Blot蛋白质电泳缓冲液的配制 | 第25页 |
·10 × Western Blot蛋白质电转印缓冲液的配制 | 第25页 |
·30 %丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液(Acr/Bic)的配制 | 第25-26页 |
·10%SDS溶液的配制 | 第26页 |
·10%过硫酸铵(APS)溶液的配制 | 第26页 |
·10 × TBS溶液的配制 | 第26页 |
·1 × TBST工作液的配制 | 第26页 |
·5 % Western Blot封闭缓冲液的配制 | 第26页 |
·鼠尾胶原的制备 | 第26-27页 |
·HCl和NaOH溶液配制 | 第27页 |
·试验方法 | 第27-37页 |
·SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养及传代培养 | 第27页 |
·试验分组 | 第27页 |
·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第27-28页 |
·胞浆钙离子浓度的检测 | 第28-29页 |
·线粒体钙离子浓度的检测 | 第29-30页 |
·内质网钙离子浓度的检测 | 第30-31页 |
·IP_3含量的检测 | 第31页 |
·蛋白质免疫印迹试验(Western Blot) | 第31-33页 |
·荧光定量PCR | 第33-36页 |
·统计学分析 | 第36-37页 |
3 结果与分析 | 第37-59页 |
·铅诱导大鼠肾小管上皮细胞胞浆钙超载 | 第37-40页 |
·铅暴露诱导大鼠肾小管上皮细胞不同区域钙分布紊乱 | 第40-42页 |
·铅暴露对大鼠肾小管上皮细胞线粒体钙及内质网钙水平的影响 | 第42-45页 |
·铅诱导线粒体钙超载的来源 | 第45-49页 |
·2-APB对铅暴露所诱导胞内钙分布紊乱的影响 | 第49-53页 |
·铅暴露对大鼠肾小管上皮细胞内IP_3含量的影响 | 第53-54页 |
·铅暴露对胞内IP_3R-1 和IP_3R-2 mRNA和蛋白表达水平的影响 | 第54-57页 |
·铅暴露对IP_3R-1 和IP_3R-2 的mRNA表达水平的影响 | 第54-55页 |
·铅暴露对IP_3R-1 和IP_3R-2 蛋白表达水平的影响 | 第55-57页 |
·2-APB或BAPTA-AM对铅所诱导细胞凋亡的影响 | 第57-59页 |
4 讨论 | 第59-64页 |
·铅暴露诱导大鼠肾小管上皮细胞钙分布紊乱 | 第59-60页 |
·内质网与钙分布紊乱 | 第60-61页 |
·IP_3R通道介导的内质网钙释放 | 第61-62页 |
·钙分布紊乱与细胞凋亡 | 第62-64页 |
5 结论 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-74页 |
致谢 | 第74页 |