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胞内钙重分布在铅所诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用

中文摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 前言第13-22页
   ·铅的污染状况及毒性研究进展第13-14页
     ·铅的理化性质第13页
     ·铅的污染状况第13-14页
     ·铅的肾毒性研究进展第14页
   ·细胞凋亡研究进展第14-17页
     ·死亡受体通路第15页
     ·线粒体通路第15-16页
     ·内质网通路第16-17页
   ·钙离子信号与细胞凋亡第17-22页
     ·胞内钙离子正常分布状况第18页
     ·胞内钙稳态的维持第18-20页
     ·钙稳态失衡与细胞凋亡第20-22页
2 材料与方法第22-37页
   ·实验动物第22页
   ·主要试剂第22-23页
   ·主要仪器第23-24页
   ·实验所用溶液的配制第24-27页
     ·磷酸盐缓冲液的配制第24页
     ·含钙及无钙DMEM-F12细胞培养基的配制与除菌第24-25页
     ·醋酸铅溶液的配制第25页
     ·2-APB的配制第25页
     ·BAPTA-AM的配制第25页
     ·10 × Western Blot蛋白质电泳缓冲液的配制第25页
     ·10 × Western Blot蛋白质电转印缓冲液的配制第25页
     ·30 %丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液(Acr/Bic)的配制第25-26页
     ·10%SDS溶液的配制第26页
     ·10%过硫酸铵(APS)溶液的配制第26页
     ·10 × TBS溶液的配制第26页
     ·1 × TBST工作液的配制第26页
     ·5 % Western Blot封闭缓冲液的配制第26页
     ·鼠尾胶原的制备第26-27页
     ·HCl和NaOH溶液配制第27页
   ·试验方法第27-37页
     ·SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养及传代培养第27页
     ·试验分组第27页
     ·流式细胞仪检测细胞凋亡第27-28页
     ·胞浆钙离子浓度的检测第28-29页
     ·线粒体钙离子浓度的检测第29-30页
     ·内质网钙离子浓度的检测第30-31页
     ·IP_3含量的检测第31页
     ·蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)第31-33页
     ·荧光定量PCR第33-36页
     ·统计学分析第36-37页
3 结果与分析第37-59页
   ·铅诱导大鼠肾小管上皮细胞胞浆钙超载第37-40页
   ·铅暴露诱导大鼠肾小管上皮细胞不同区域钙分布紊乱第40-42页
   ·铅暴露对大鼠肾小管上皮细胞线粒体钙及内质网钙水平的影响第42-45页
   ·铅诱导线粒体钙超载的来源第45-49页
   ·2-APB对铅暴露所诱导胞内钙分布紊乱的影响第49-53页
   ·铅暴露对大鼠肾小管上皮细胞内IP_3含量的影响第53-54页
   ·铅暴露对胞内IP_3R-1 和IP_3R-2 mRNA和蛋白表达水平的影响第54-57页
     ·铅暴露对IP_3R-1 和IP_3R-2 的mRNA表达水平的影响第54-55页
     ·铅暴露对IP_3R-1 和IP_3R-2 蛋白表达水平的影响第55-57页
   ·2-APB或BAPTA-AM对铅所诱导细胞凋亡的影响第57-59页
4 讨论第59-64页
   ·铅暴露诱导大鼠肾小管上皮细胞钙分布紊乱第59-60页
   ·内质网与钙分布紊乱第60-61页
   ·IP_3R通道介导的内质网钙释放第61-62页
   ·钙分布紊乱与细胞凋亡第62-64页
5 结论第64-65页
参考文献第65-74页
致谢第74页

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