| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 主要符号列表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 1 材料与方法 | 第21-30页 |
| ·实验菌株、质粒和血清 | 第21页 |
| ·酶类与主要试剂(盒) | 第21页 |
| ·主要培养基与溶液的配置 | 第21页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·PCV2 WH株去信号肽ORF2基因的原核表达及其抗体的制备 | 第22-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·病毒DNA的提取及目的基因的获得 | 第22页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第22-23页 |
| ·重组Cap蛋白的诱导表达及分析 | 第23页 |
| ·重组Cap蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| ·重组Cap蛋白的Western blotting鉴定 | 第24页 |
| ·重组Cap蛋白的浓度测定 | 第24页 |
| ·抗重组Cap蛋白血清的制备 | 第24页 |
| ·PCV2 WH株感染PK-15细胞的检测 | 第24-25页 |
| ·PCV2 ORF2基因在昆虫细胞中的表达 | 第25-28页 |
| ·杆状病毒转移载体的构建 | 第25-26页 |
| ·重组穿梭载体rBacmid-Cap2的构建 | 第26-27页 |
| ·重组杆状病毒的获得与病毒扩增 | 第27页 |
| ·重组Cap蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达及鉴定 | 第27-28页 |
| ·病毒的滴度测定 | 第28页 |
| ·重组Cap蛋白表达条件的优化 | 第28页 |
| ·重组Cap蛋白免疫小鼠实验 | 第28-30页 |
| ·样品的处理及实验动物分组 | 第28页 |
| ·对免疫小鼠血清抗体动态监测 | 第28-29页 |
| ·免疫小鼠血清抗体中和活性的分析 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-42页 |
| ·PCV2 WH株去信号肽ORF2基因的原核表达及其抗体的制备 | 第30-33页 |
| ·目的基因的扩增 | 第30页 |
| ·表达重组质粒pET-32a-cap2的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组Cap蛋白的诱导表达、可溶性分析及纯化 | 第31-32页 |
| ·重组Cap蛋白的浓度测定 | 第32-33页 |
| ·PCV2 WH株感染PK-15细胞的检测 | 第33页 |
| ·PCV2 ORF2优化基因在昆虫细胞中的表达 | 第33-40页 |
| ·重组转移载体pFastBac~(TM)HTA-cap2的鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-cap2的鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组杆状病毒的获得及鉴定 | 第36-37页 |
| ·Western blotting分析重组Cap蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达 | 第37-38页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)检测目的蛋白的表达 | 第38-39页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第39页 |
| ·重组Cap蛋白表达条件的优化 | 第39-40页 |
| ·重组Cap蛋白免疫小鼠实验 | 第40-42页 |
| ·免疫小鼠血清抗体动态监测分析 | 第40页 |
| ·免疫小鼠血清中和效价的测定 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| ·PCV2 WH株ORF2基因的序列分析及其原核表达 | 第42页 |
| ·杆状病毒表达系统的选择 | 第42-43页 |
| ·核衣壳蛋白Cap在Sf9昆虫表达及影响其表达的因素 | 第43-44页 |
| ·重组Cap蛋白免疫小鼠试验 | 第44-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
