| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略词表（Abbreviation） | 第11-12页 |
| 1.文献综述 | 第12-22页 |
| ·六型分泌系统概述 | 第12-18页 |
| ·六型分泌系统简介 | 第13-16页 |
| ·六型分泌系统功能和效应因子研究进展 | 第16-18页 |
| ·hcp基因研究进展 | 第18-20页 |
| ·Hcp蛋白结构研究进展 | 第18-19页 |
| ·hcp基因功能研究进展 | 第19-20页 |
| ·致病性大肠杆菌中T6SS研究进展 | 第20-22页 |
| 2.研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 3.材料与方法 | 第23-37页 |
| ·实验材料 | 第23-29页 |
| ·菌株、质粒与细胞 | 第23-25页 |
| ·细胞及实验动物 | 第25页 |
| ·工具酶及主要试剂、试剂盒及仪器 | 第25-26页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第26-27页 |
| ·主要缓冲液与相关溶液及其配制 | 第27-28页 |
| ·使用引物 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-37页 |
| ·猪源肠外致病性大肠杆菌的培养及基因组的提取 | 第29页 |
| ·细胞的分离与培养 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态制备（氯化钙法） | 第29-30页 |
| ·重组质粒及原核表达质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·Hcp2、Hcp3 蛋白的原核表达、纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第31-32页 |
| ·Hcp2、Hcp3 蛋白多克隆抗体的制备及Western鉴定 | 第32-33页 |
| ·缺失株的筛选及PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·生长特性测定 | 第34页 |
| ·细菌间竞争分析 | 第34-35页 |
| ·吞噬后存活试验 | 第35页 |
| ·粘附侵入能力试验 | 第35-36页 |
| ·小鼠感染试验 | 第36页 |
| ·组织载菌量测定 | 第36页 |
| ·使用生物学软件 | 第36页 |
| ·统计学分析 | 第36-37页 |
| 4.结果与分析 | 第37-48页 |
| ·PCN033 T6SS基因簇分析 | 第37页 |
| ·猪源肠外致病性大肠杆菌Hcp2、Hcp3 蛋白多克隆抗体的制备 | 第37-41页 |
| ·hcp2、hcp3 基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·Hcp2-30a原核表达质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·Hcp2-His、Hcp3-His融合蛋白的表达与纯化 | 第39-41页 |
| ·猪源肠外致病性大肠杆菌缺失株 Δhcp1、Δhcp2、Δhcp1Δhcp2Δhcp3 的构建及鉴定 | 第41-43页 |
| ·重组自杀性质粒pRE112-Δhcp1、pRE112-Δhcp2 的构建 | 第41页 |
| ·缺失株 Δhcp1、Δhcp2、Δhcp1Δhcp2Δhcp3 的构建及鉴定 | 第41-43页 |
| ·菌株生长特性测定 | 第43页 |
| ·细菌间竞争能力分析 | 第43-44页 |
| ·吞噬后存活比较 | 第44-45页 |
| ·粘附侵入比较 | 第45页 |
| ·小鼠感染模型死亡率比较 | 第45-46页 |
| ·小鼠体内组织载菌量比较 | 第46-48页 |
| 5.讨论 | 第48-52页 |
| ·hcp基因的选定 | 第48页 |
| ·基因缺失突变株的构建 | 第48-49页 |
| ·hcp基因对PCN033 细菌间竞争能力的影响 | 第49页 |
| ·hcp基因对PCN033 致病性的影响 | 第49-50页 |
| ·后续工作展望 | 第50-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
